[背景與目的]:動脈粥樣硬化（atherosclerosis,As）是一種慢性炎癥性疾病,其中血管炎癥被認(rèn)為是As發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。當(dāng)血管受損時,巨噬細(xì)胞作為免疫系統(tǒng)的主要效應(yīng)細(xì)胞,被募集至受損部位并大量蓄積脂質(zhì)形成泡沫細(xì)胞;與此同時,泡沫細(xì)胞促進(jìn)大量的巨噬細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞等炎癥細(xì)胞聚集于損傷部位。這些免疫細(xì)胞可釋放各種炎癥介質(zhì)進(jìn)一步促進(jìn)泡沫細(xì)胞形成,形成惡性循環(huán),加劇As發(fā)生發(fā)展。巨噬細(xì)胞的相關(guān)調(diào)控機(jī)制是As疾病防治研究的重要環(huán)節(jié)。近年來,RNA修飾作為新興調(diào)控方式,其對疾病的影響已受到學(xué)者的廣泛關(guān)注。其中N6-甲基腺嘌呤（N6-methyladenosine,m6A）作為mRNA上最為豐富的修飾,對于基因轉(zhuǎn)錄、翻譯、表達(dá)調(diào)控等生命進(jìn)程發(fā)揮著重要調(diào)控作用。m6A修飾是指腺嘌呤第6位N原子上的甲基化修飾,其中METTL3（methyltransferase like 3,METTL3）亞基是m6A甲基轉(zhuǎn)移酶復(fù)合體中的核心組分,在人體內(nèi)廣泛分布。近期研究發(fā)現(xiàn),METTL3過表達(dá)可以抑制脂肪水平并降低胞內(nèi)甘油三酯,另在心肌重構(gòu)等功能中也發(fā)現(xiàn)METTL3具有重要調(diào)控作用。METTL3和m6... 

【文章來源】：南華大學(xué)湖南省

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

METTL3在人頸動脈動脈粥樣硬化斑塊內(nèi)廣泛表達(dá)（黑色虛線所標(biāo)記部位為斑塊壞死核心；Scalebar=100μm）

20圖4.2METTL3在小鼠As斑塊內(nèi)廣泛表達(dá)（圖A、B：Scalebar=100μm；圖C：Scalebar=20μm）巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞是As斑塊中的重要成分。內(nèi)皮細(xì)胞受損后，單核細(xì)胞被募集到受損內(nèi)皮周圍分化成巨噬細(xì)胞，巨噬細(xì)胞荷脂后形成泡沫細(xì)胞，泡沫細(xì)胞隨即不斷分泌多種炎癥因子促進(jìn)斑塊發(fā)展，斑塊部位聚集的泡沫細(xì)胞對于斑塊的穩(wěn)定和發(fā)展發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用。其中泡沫細(xì)胞的影響貫穿As整個周期。因此，本實驗進(jìn)一步檢測在斑塊中巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞中METTL3的表達(dá)情況。免疫熒光實驗將對此猜想進(jìn)行驗證。選用MAC3標(biāo)記巨噬細(xì)胞，DAPI染核，并通過不同的熒光二抗分別結(jié)合MAC3（紅）和METTL3（綠），將所得圖片通過軟件處理對二者表達(dá)進(jìn)行共定位標(biāo)記。熒光結(jié)果如下圖4.3所示，在小鼠As斑塊中，METTL3在斑塊中廣泛表達(dá)，箭頭所指部位即為METLL3和巨噬細(xì)胞標(biāo)記物的共同表達(dá)部位，這一結(jié)果說明METTL3存在于巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞中。

21圖4.3小鼠As斑塊中，METTL3在巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞內(nèi)表達(dá)（B：小鼠As斑塊中，METTL3的表達(dá)；C：小鼠As斑塊中，巨噬細(xì)胞的表達(dá)；D：箭頭所指部位即為巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞和METTL3共同表達(dá)部位；Scalebar=100μm）以上結(jié)果說明，METTL3在人和小鼠的As斑塊中均存在廣泛表達(dá)，并且在巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞中也廣泛表達(dá)，METTL3與As斑塊之間可能存在密切聯(lián)系。為了進(jìn)一步明確METTL3是否參與巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞的相關(guān)調(diào)控，本項研究選取THP-1為研究對象，從細(xì)胞水平明確METTL3的調(diào)控作用。4.2METTL3和m6A修飾在巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞中上調(diào)巨噬細(xì)胞泡沫化后對斑塊穩(wěn)定和發(fā)展尤為重要。為明確METTL3在巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞中的變化，實驗選取THP-1細(xì)胞經(jīng)PMA誘導(dǎo)后形成巨噬細(xì)胞，并予以不同濃度的ox-LDL孵育處理，24h后提取不同組別的蛋白質(zhì)，使用WB檢測不同濃度ox-LDL的處理下METTL3的表達(dá)變化。結(jié)果顯示經(jīng)ox-LDL孵育后，METLL3的表達(dá)隨ox-LDL濃度增加而出現(xiàn)增長（圖4.4）。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]巨噬細(xì)胞凋亡與動脈粥樣硬化[J]. 張艷,林玉壁,孫雷.  中國動脈硬化雜志. 2008(05)



本文編號：3392984