目的:通過構(gòu)建ITP小鼠模型,明確益氣養(yǎng)陰清熱化瘀方對ITP的治療效果并對各組小鼠外周血Th17、Treg細胞的比值、脾臟中Th17、Treg相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子及外周血Th17、Treg相關(guān)細胞因子的水平進行檢測分析。探討該方在ITP中發(fā)揮治療作用的最佳有效劑量與可能的作用靶點,為臨床治療ITP提供相應的理論依據(jù)。方法:1.ITP小鼠模型的建立及評估:將健康雌性BALB/C小鼠隨機分為正常組（n=20）,ITP模型組（n=110）,采用針對血小板表面膜糖蛋白GPIIb/IIIa的被動免疫法,將模型組小鼠腹腔注射含2μg大鼠抗小鼠CD41單克隆抗體（MWReg30單抗）的磷酸鹽緩沖液200μl,造成持續(xù)的血小板減少癥,建立ITP小鼠模型。正常組則采用同樣的方式注射等量生理鹽水。造模開始第1、3、5、7天通過檢測外周血小板計數(shù)并結(jié)合骨髓巨核細胞象進行模型評估。2.益氣養(yǎng)陰清熱化瘀方對ITP模型的藥效學研究:實驗第8天將ITP模型組再次隨機分為模型組、合方（益氣養(yǎng)陰清熱化瘀方）低、中、高劑量組、西藥對照組（以醋酸潑尼松對照）（n=20）,各治療組按給藥劑量進行藥物干預2周,觀察各組小鼠一般狀況的改... 

【文章來源】：天津醫(yī)科大學天津市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

ITP小鼠模型的建立

中藥中劑量組 966.33±62.32☆☆中藥高劑量組 876.30±39.58☆組相比：△P＜0.05；與模型組相比：☆P＜0.05，☆☆P＜：* P＜0.05陰清熱化瘀方對 ITP 模型骨髓巨核細胞的影響胞成熟障礙是 ITP 特有的骨髓象病理改變。如圖 2 所可見成熟產(chǎn)板的巨核細胞：胞質(zhì)呈均勻粉紫色，質(zhì)內(nèi)充粒及血小板，胞膜呈偽足狀，其內(nèi)側(cè)及外側(cè)可見血小板髓象可見大量幼稚巨核細胞，呈裸核及小巨核細胞表現(xiàn)、扭轉(zhuǎn)，核染色質(zhì)呈粗顆粒狀，排列緊密，可見核仁或色，近核處出現(xiàn)少量天青藍顆粒。各治療組小鼠骨髓巨及幼稚巨核細胞的數(shù)量均有所減少，以合方中劑量組更

圖 3 三明治夾固定順序示意圖將反應膜再次用 1×TBST 在 37℃下，洗滌 3 次×10 min洗片：用保鮮膜將 PVDF 膜封好，放置在暗盒中。X 膠影、定影；ge J 軟件分析灰度值。 檢測 Th17、Treg 細胞轉(zhuǎn)錄因子水平樣本總 RNA取組織樣本中總 RNA。實驗操作步驟如下：磨組織樣品，后加入至含有 1 ml Trizol 的離心管中，漩 37 ℃下靜置 8 min； ml 氯仿，劇烈混勻 30 s，靜置于冰盒上 3 min；2,000 rpm 離心 15 min 混合物將分離為兩相，使 RNA 留水相置入另一 EP 管中；

【參考文獻】：
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