氧化應(yīng)激條件下自噬及PARP-1在血管平滑肌細(xì)胞中的作用及其關(guān)系的研究
發(fā)布時(shí)間：2021-09-04 02:23
目的:動(dòng)脈粥樣硬化（atherosclerosis,AS）是一類嚴(yán)重危害人類健康的疾病,氧化應(yīng)激在其發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮了重要作用[1]。目前研究發(fā)現(xiàn)自噬與AS密切相關(guān),參與并調(diào)控AS的發(fā)生發(fā)展進(jìn)程。越來越多證據(jù)表明各種致動(dòng)脈粥樣硬化因素產(chǎn)生的活性氧（reactive oxygen species,ROS）作為誘導(dǎo)自噬的信號(hào)分子,在自噬的形成過程中起著重要作用[2]。自噬是一把“雙刃劍”,一方面自噬可以在氧化應(yīng)激等不利條件下保護(hù)細(xì)胞;另一方面如果保護(hù)機(jī)制失敗,就會(huì)啟動(dòng)死亡程序?qū)е录?xì)胞死亡。既往一些研究證實(shí)氧化脂質(zhì)誘導(dǎo)的自噬對(duì)血管平滑肌細(xì)胞（vascular smooth muscle cells,VSMCs）發(fā)揮保護(hù)作用。然而最新的一項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)自噬基因敲除VSMCs抗氧化應(yīng)激能力明顯增加,細(xì)胞死亡減少[3]。目前自噬在氧化應(yīng)激中的確切機(jī)制尚未闡明。深入研究自噬的調(diào)控機(jī)制對(duì)AS的防治以及阻止AS的繼發(fā)病變具有重要意義。多聚ADP核糖聚合酶-1（Poly（ADP-ribose）polymerase-1,PARP-1）是一種廣泛存在...
【文章來源】：中國醫(yī)科大學(xué)遼寧省
【文章頁數(shù)】：69 頁
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【部分圖文】：
原代培養(yǎng)的VSMCs免疫熒光鑒定結(jié)果(×400倍)
原代培養(yǎng)的 VSMCs 免疫熒光鑒定結(jié)果(×400 倍)3.2 H2O2 對(duì)血管平滑肌細(xì)胞生存率的影響H2O2 被廣泛應(yīng)用于體外細(xì)胞氧化應(yīng)激模型的建立。我們觀察不同濃度 H2O2和不同作用時(shí)間條件下 VSMCs 生存率的變化。首先我們用不同濃度的 H2O2 處理小鼠血管平滑肌細(xì)胞 16 h，空白組作為對(duì)照。結(jié)果顯示 H2O2 呈濃度依賴性的降低 VSMCs 活力（圖 3A）。我們采用 0.1 mmol/L H2O2 作用 VSMCs 不同時(shí)間后，結(jié)果顯示 VSMCs 活性表現(xiàn)為時(shí)間依賴性降低，在 16 小時(shí)作用效果最明顯，在 24 小時(shí)活力較前略有恢復(fù)（圖 3B）。A B
中國醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文LC3 是目前公認(rèn)的自噬分子標(biāo)記物。自噬過程中泛素樣體系對(duì)定位于胞漿的LC3-I 進(jìn)行修飾加工，并產(chǎn)生定位于自噬小體的 LC3-II。LC3-II 的含量與自噬的程度成正比。Beclin-1 也是調(diào)節(jié)自噬的主要分子，參與自噬體形成的多個(gè)環(huán)節(jié)。我們利用 Western-blot 檢測(cè) LC3-II 和 Beclin-1 蛋白的表達(dá)以評(píng)估自噬水平。我們檢測(cè) H2O2 處理 VSMCs 后不同時(shí)間點(diǎn)自噬標(biāo)志蛋白的變化情況。觀察指標(biāo)為 LC3-II/LC3-I 比值和 Beclin-1。如圖 4 所示：與對(duì)照組比較，LC3-II/LC3I比值隨時(shí)間逐漸增加。我們進(jìn)一步檢測(cè)了 Beclin-1 的表達(dá)水平，亦表現(xiàn)為隨時(shí)間增加的趨勢(shì)。
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Role of AMPK in atherosclerosis via autophagy regulation[J]. Hanxiao Ou,Chuhao Liu,Wenjie Feng,Xinwen Xiao,Shengsong Tang,Zhongcheng Mo. Science China（Life Sciences）. 2018(10)
[2]PARP-1抑制對(duì)PM2.5致人支氣管上皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)的保護(hù)作用[J]. 黃慶,張晶晶,張遵真. 四川大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2016(06)
[3]Inflammation, oxidative stress and renin angiotensin system in atherosclerosis[J]. Kazim Husain,Wilfredo Hernandez,Rais A Ansari,Leon Ferder. World Journal of Biological Chemistry. 2015(03)
本文編號(hào)：3382363
【文章來源】：中國醫(yī)科大學(xué)遼寧省
【文章頁數(shù)】：69 頁
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【部分圖文】：
原代培養(yǎng)的VSMCs免疫熒光鑒定結(jié)果(×400倍)
原代培養(yǎng)的 VSMCs 免疫熒光鑒定結(jié)果(×400 倍)3.2 H2O2 對(duì)血管平滑肌細(xì)胞生存率的影響H2O2 被廣泛應(yīng)用于體外細(xì)胞氧化應(yīng)激模型的建立。我們觀察不同濃度 H2O2和不同作用時(shí)間條件下 VSMCs 生存率的變化。首先我們用不同濃度的 H2O2 處理小鼠血管平滑肌細(xì)胞 16 h，空白組作為對(duì)照。結(jié)果顯示 H2O2 呈濃度依賴性的降低 VSMCs 活力（圖 3A）。我們采用 0.1 mmol/L H2O2 作用 VSMCs 不同時(shí)間后，結(jié)果顯示 VSMCs 活性表現(xiàn)為時(shí)間依賴性降低，在 16 小時(shí)作用效果最明顯，在 24 小時(shí)活力較前略有恢復(fù)（圖 3B）。A B
中國醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文LC3 是目前公認(rèn)的自噬分子標(biāo)記物。自噬過程中泛素樣體系對(duì)定位于胞漿的LC3-I 進(jìn)行修飾加工，并產(chǎn)生定位于自噬小體的 LC3-II。LC3-II 的含量與自噬的程度成正比。Beclin-1 也是調(diào)節(jié)自噬的主要分子，參與自噬體形成的多個(gè)環(huán)節(jié)。我們利用 Western-blot 檢測(cè) LC3-II 和 Beclin-1 蛋白的表達(dá)以評(píng)估自噬水平。我們檢測(cè) H2O2 處理 VSMCs 后不同時(shí)間點(diǎn)自噬標(biāo)志蛋白的變化情況。觀察指標(biāo)為 LC3-II/LC3-I 比值和 Beclin-1。如圖 4 所示：與對(duì)照組比較，LC3-II/LC3I比值隨時(shí)間逐漸增加。我們進(jìn)一步檢測(cè)了 Beclin-1 的表達(dá)水平，亦表現(xiàn)為隨時(shí)間增加的趨勢(shì)。
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Role of AMPK in atherosclerosis via autophagy regulation[J]. Hanxiao Ou,Chuhao Liu,Wenjie Feng,Xinwen Xiao,Shengsong Tang,Zhongcheng Mo. Science China（Life Sciences）. 2018(10)
[2]PARP-1抑制對(duì)PM2.5致人支氣管上皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)的保護(hù)作用[J]. 黃慶,張晶晶,張遵真. 四川大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2016(06)
[3]Inflammation, oxidative stress and renin angiotensin system in atherosclerosis[J]. Kazim Husain,Wilfredo Hernandez,Rais A Ansari,Leon Ferder. World Journal of Biological Chemistry. 2015(03)
本文編號(hào)：3382363
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