目的:探討葉酸（folic acid,FA）對(duì)血管平滑肌細(xì)胞（VSMCs）增殖和遷移的影響及其機(jī)制。方法:取SD大鼠的主動(dòng)脈,采用組織貼塊法培養(yǎng)VSMCs,隨機(jī)分組進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。采用CCK-8和Ed U法檢測(cè)葉酸對(duì)VSMCs活力和增殖能力的影響。采用劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell法檢測(cè)葉酸對(duì)VSMCs遷移和侵襲的影響。采用Western blot法檢測(cè)細(xì)胞增殖核抗原（PCNA）蛋白表達(dá)以及血小板源性生長(zhǎng)因子受體（PDGFR）和細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1/2（ERK1/2）蛋白的磷酸化水平。結(jié)果:葉酸抑制血小板源性生長(zhǎng)因子（PDGF）誘導(dǎo)的VSMCs的活力,并呈濃度依賴(lài)性（P<0.05）。葉酸抑制PDGF誘導(dǎo)的VSMCs的遷移,并呈濃度依賴(lài)性（P<0.05）。葉酸降低PCNA表達(dá)和PDGFR磷酸化水平,并抑制PDGF激活的ERK1/2信號(hào)通路。結(jié)論:葉酸降低PDGF誘導(dǎo)的VSMCs PCNA和p-PDGFR蛋白水平,下調(diào)ERK1/2信號(hào)通路,從而抑制VSMCs的增殖和遷移。 

【文章來(lái)源】：中國(guó)病理生理雜志. 2017,33(03)北大核心CSCD

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各組VSMCs的細(xì)胞增殖能力2葉酸抑制PDGF誘導(dǎo)的VSMCs遷移3葉酸抑制PDGF激活的ERK1/2信號(hào)通路

Figure2．TheeffectoffolicacidontheproteinexpressionofPCNAintheVSMCswasdetectedbyWesternblot．Mean±SD．n=3．*P＜0.05vscontrolgroup;#P＜0.05vsPDGFgroup．圖2各組VSMCs增殖標(biāo)志蛋白PCNA的表達(dá)水平4葉酸通過(guò)下調(diào)ERK1/2抑制PDGF誘導(dǎo)的VSMCs活力和增殖遷移能力為了證實(shí)ERK1/2信號(hào)通路參與PDGF誘導(dǎo)VSMCs活力和增殖遷移能力，本研究加入ERK1/2通路抑制劑PD98059［8］，驗(yàn)證PD98059對(duì)PDGF誘導(dǎo)VSMCs活力和增殖遷移能力的作用，結(jié)果如圖5顯示。PD98059抑制PDGF誘導(dǎo)的VSMCs活力和增殖遷移能力(P＜0.05)。討論本研究結(jié)果顯示PDGF能促進(jìn)VSMCs活力、增殖遷移能力和PCNA蛋白的表達(dá)，并發(fā)現(xiàn)葉酸能抑制PDGF誘導(dǎo)的VSMCs活力、增殖遷移能力和PCNA、PDGFR蛋白的表達(dá)，并進(jìn)一步提示具有量效關(guān)系，PDGF激活ERK1/2信號(hào)通路，而葉酸抑制PDGF-BB激活的ERK1/2信號(hào)通路。ERK1/2信號(hào)通路抑制劑PD98059同樣抑制PDGF-BB誘導(dǎo)的VSMCs活力、增殖遷移能力和PCNA、PDGFR蛋白的表達(dá)。這些結(jié)果表明葉酸的這種效應(yīng)是通過(guò)下調(diào)ERK1/2信號(hào)通路實(shí)現(xiàn)的。Figure3．Theeffectsoffolicacidonthemigration(A)andinvasion(B)oftheVSMCswereexaminedbywoundhealingassayandTranswellassay(×100)．Mean±SD．n=3．*P＜0.05vscontrolgroup;#P＜0.05vsPDGFgroup．圖3各組VSMCs遷移和侵襲能力·408·

Figure4．TheeffectsoffolicacidonthephosphorylationofPDGFRandERK1/2intheVSMCsweredetectedbyWesternblot．Mean±SD．n=3．*P＜0.05vscontrolgroup;#P＜0.05vsPDGFgroup．圖4各組VSMCsPDGFR和ERK1/2磷酸化水平的變化Figure5．TheeffectoffolicacidonERK1/2signalingpathwayverifiedbyERK1/2inhibitorPD98059wasdetermined．A:theviabili-tyoftheVSMCswasmeasuredbyCCK-8assay;B:theproliferationabilityoftheVSMCswasexaminedbyEdUcellproli-ferationassay(×100);C:themigrationabilityoftheVSMCswasexaminedbywoundhealingassay(×100);D:thein-vasionabilityoftheVSMCswasexaminedbytranswellassay(×100);E:theproteinlevelsofPCNA，p-PDGFRandp-ERK1/2weredeterminedbyWesternblot．Mean±SD．n=3．*P＜0.05vscontrolgroup;#P＜0.05vsPDGFgroup．圖5PD98059抑制PDGF誘導(dǎo)VSMCs增殖和遷移能力葉酸與其活性代謝物質(zhì)5-甲基四氫葉酸是人類(lèi)必需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，在核苷酸的合成和甲基化反應(yīng)中扮演重要角色［9］。流行病學(xué)研究表明補(bǔ)充葉酸能降低心血管疾病不良事件的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)［10］。外源性補(bǔ)充葉酸可抑制氧化應(yīng)激，改善血管內(nèi)皮功能，延緩動(dòng)脈粥樣硬化的進(jìn)展，有助于冠心病的防治。高劑量葉酸預(yù)處理改善缺血心肌功能，并減輕缺血再灌注損傷［11］。Cheng等［12］報(bào)道葉酸通過(guò)抑制ERK1/2/NOX4/ROS信號(hào)通路減輕由低氧所致的血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷。何志勇等［13］報(bào)道葉酸通過(guò)減少內(nèi)皮細(xì)胞表·409·

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]大鼠胸主動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞原代培養(yǎng)方法的改進(jìn)[J]. 孟立平,蔣承建,趙飛,郭艷,池菊芳,郭航遠(yuǎn).  溫州醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2015(08)
[2]活性氧和ERK1/2信號(hào)通路在缺氧大鼠肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖和凋亡中的作用[J]. 湯娜娜,劉先勝,徐永健,倪望,陳士新.  中國(guó)病理生理雜志. 2009(01)
[3]葉酸拮抗同型半胱氨酸誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的作用機(jī)制[J]. 何志勇,張雄,王小同.  中國(guó)病理生理雜志. 2007(04)



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