目的（1）構(gòu)建低氧響應(yīng)性的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（vascular endothelial growth factor,簡(jiǎn)稱VEGF）真核表達(dá)載體,建立體內(nèi)、外遞送方法并對(duì)其效能進(jìn)行鑒定;（2）以聚乳酸-羥基乙酸共聚物（Polylactic acid-glycolic acid copolymer,PLGA）作為藥物載體,探討載體粒徑對(duì)化藥、核酸等不同藥物釋放的影響,優(yōu)化針對(duì)不同藥物的載體粒徑參數(shù);（3）針對(duì)心肌梗死后的急性氧化應(yīng)激與長(zhǎng)期的缺氧微環(huán)境特征,采用模塊化和可控的層層組裝技術(shù)開發(fā)具有急性抗氧化與低氧響應(yīng)型VEGF調(diào)控表達(dá)的智能藥物遞送系統(tǒng);（4）在體外細(xì)胞模型與心肌梗死小鼠模型中,對(duì)上述智能藥物遞送系統(tǒng)的心肌保護(hù)與心梗修復(fù)功能進(jìn)行系統(tǒng)研究,以期建立新型的心肌梗死干預(yù)方法。方法（1）應(yīng)用基因重組技術(shù),在真核表達(dá)載體pGL4.73[hRluc/SV40]（pSV）質(zhì)�；A(chǔ)上,將2個(gè)串聯(lián)的低氧敏感性EPO增強(qiáng)子插入啟動(dòng)子SV40上游,構(gòu)建低氧響應(yīng)型表達(dá)系統(tǒng)（pEPO-SV）,以海腎熒光素酶（Rluc）為下游報(bào)告基因,評(píng)價(jià)其低氧敏感性能;隨后,將VEGF165基因取代Rluc插入到pEPO... 

【文章來(lái)源】：錦州醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁(yè)數(shù)】：90 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

重組質(zhì)粒構(gòu)建注：EPO增強(qiáng)子通過(guò)酶切位點(diǎn)XhoⅠ和BglⅡ嵌入原質(zhì)粒pSV構(gòu)建重組子，目的基因

VEGF165 通 過(guò) 酶 切 位 點(diǎn) Hind Ⅲ 和 Xba Ⅰ 嵌 入 進(jìn) 質(zhì) 粒 pEPO-SV ， 構(gòu) 建 重 組 子pEPO-SV-VEGF。（二）質(zhì)粒 DNA 測(cè)序及酶切鑒定1、PCR 檢測(cè)。結(jié)果如圖 1.2 為不同質(zhì)粒中 EPO 增強(qiáng)子及 VEGF165 序列的 PCR 鑒定結(jié)果，圖 A 不通泳道從左向右依次為：Marker，分別以質(zhì)粒pcDNA3 .1、質(zhì)粒pSV-VEGF和pEPO-SV-VEGF為模板PCR擴(kuò)增得到VEGF165目的基因片段，大約 500bp 處的亮帶（圖 A）；圖 B 泳道從左向右分別為 Marker、以質(zhì)粒 pEPO、pEPO-SV 和 pEPO-SV-VEGF 為模板，PCR 擴(kuò)增得到 EPO 串聯(lián)增強(qiáng)子片段，大約 100bp 處的亮帶，如圖 B。

GAGGCCCTACGTGCTGTCTCACACAGCCTGTCTGAGGCGGCCCTACGTGCTGTCTCACACAGCCTGTCTGCCGGCGAGATCTGAGGCCCTACGTGCTGTCTCACACAGCCTGTCTGAGGCGGCCCTACGTGCTGTCTCACACAGCCTGTCTGCCGGCGAGATCT與測(cè)序序列完全匹配。驗(yàn)證。進(jìn)一步通過(guò)酶切與 DNA 電泳驗(yàn)證質(zhì)粒 pE成功插入，通過(guò) HindⅢ和 XbaⅠ對(duì)質(zhì)粒 pEPO-S通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行檢測(cè)。瓊脂糖凝膠電泳檢帶，500-750bp 區(qū)間條帶與所插入的 VEGF165 成功插入；大于 2000bp 的條帶區(qū)為切出的質(zhì)粒骨

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Stem cell mechanisms during left ventricular remodeling post-myocardial infarction:Repair and regeneration[J]. Rogelio Zamilpa,Mary M Navarro,Iris Flores,Sy Griffey.  World Journal of Cardiology. 2014(07)
[2]氯化鈷誘導(dǎo)心肌細(xì)胞化學(xué)性缺氧HIF-1α表達(dá)的研究[J]. 石朔,王利華,郭睿,張敏,苗瑩,張淼,李彪.  診斷學(xué)理論與實(shí)踐. 2013(05)
[3]乳酸-羥基乙酸共聚物微球、納米粒載藥體系的研究進(jìn)展[J]. 陳紅麗,劉瑞,南文濱.  中國(guó)藥房. 2012(37)
[4]VEGF165基因治療對(duì)心肌梗死大鼠心功能和心肌細(xì)胞凋亡的影響[J]. 楊德寨,尹瑞興,吳海,黃凱,巫相宏,陳宇明.  廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2005(02)



本文編號(hào)：3366333