研究背景:心肌缺血再灌注損傷（myocardial ischemia-reperfusion injury,MIRI）是臨床心臟病學(xué)的重要問題,指心肌缺血一段時間后,由于血液再通,導(dǎo)致的比血管閉塞時更為嚴(yán)重的心肌損傷。脊髓是神經(jīng)系統(tǒng)的低級中樞,心臟的感覺神經(jīng)和交感神經(jīng)纖維在其內(nèi)走行。近年來脊髓在心肌再灌注損傷的研究中發(fā)揮的作用日益受到重視。有研究表明心臟缺血再灌注損傷與心肌lncRNAs異常表達(dá)存在密切關(guān)系,但較少見到脊髓lncRNAs的異常表達(dá)對MIRI影響的報道。研究目的:探討心肌缺血再灌注損傷時脊髓中l(wèi)ncRNAs的表達(dá)變化及其在再灌注早期發(fā)揮的潛在作用。研究方法:健康成年雄性Sprague Dawley大鼠（體重250-300 g）,隨機分為2組,即control組和model組,制備心肌缺血再灌注損傷模型。心肌缺血30 min再灌注2 h后,迅速分離大鼠上胸段脊髓組織,應(yīng)用轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)篩選脊髓中差異表達(dá)的mRNAs和lncRNAs,并通過Real-time PCR對部分表達(dá)高度異常的mRNAs和lncRNAs進(jìn)行驗證。通過GO分析和Pathway分析對差異基因進(jìn)行功能分析以... 

【文章來源】：華中科技大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

脊神經(jīng)的投射分布

華 中 科 技 大 學(xué) 碩 士 學(xué) 位 論 文胸膜，避免暴力撕扯，減少出血。剪斷第三肋骨，注意斷端不要太靠近胸骨出血。用撐開器撐開胸腔，暴露心臟。用鑷子輕輕撕開心包膜，潤濕的棉球耳，判斷冠狀動脈的位置，一般在冠狀靜脈的左下方。用 6-0 的帶線縫合針肺動脈根部與左心耳之間的一小束心肌，結(jié)扎線與血管間可放置一根長約 5明硅膠管，隨后拉緊結(jié)扎線。結(jié)扎后肉眼可見左心室壁局部很快由紅色變?yōu)樯n圖顯示 ST 段明顯抬高，T 波高尖，此為模型成功的標(biāo)志。30 min 后松解結(jié)扎脈閉塞而蒼白的心肌恢復(fù)血流灌注，顏色逐漸恢復(fù)，心電圖顯示抬高的 ST T 波逐漸恢復(fù)，表明冠脈再灌注成功。對照組模型中縫合線只穿過心肌，不，其余操作步驟與模型組相同。（圖 2）

用無水乙醇進(jìn)行脫水，后將切片置于二甲苯透明，風(fēng)干后在已樹膠封片，鏡檢。高通量測序模成功的模型組大鼠和假手術(shù)組各 3 只，手術(shù)結(jié)束后立即取出進(jìn)行液氮速凍，保存于-80℃冰箱，用于轉(zhuǎn)錄組高通量測序。測序流程（圖 3）：織首先提取總 RNA，檢測 RNA 的濃度、純度及完整度。單 2 ug，濃度≥100 ng/μL，OD 260/280 介于 1.8~2.2 之間�？� RNARNA 和 ncRNA；將 mRNA 片段化并以之為模板，合成 cDNA物合成 cDNA 第二鏈。合成的 cDNA 經(jīng)純化后進(jìn)行末端修復(fù)，尿苷酶（UNG）降解第二條鏈，隨后進(jìn)行 PCR 擴增，構(gòu)建na HiSeqTM 進(jìn)行測序。


本文編號：3355305