本文關(guān)鍵詞：雌激素激活PI3K-Akt通路抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激凋亡，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:本研究的目的是明確雌激素對內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(endoplasmic reticulum stress,ERS)及過度的ERS誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)凋亡的抑制作用,并進(jìn)一步研究其抑制作用的分子機(jī)制,以探討雌激素對心血管的保護(hù)機(jī)制。方法:1 10μmol/l的衣霉素(Tunicamycin,TM)誘導(dǎo)HUVEC10小時或2mmol/l的二硫蘇糖醇(Dithiothreitol,DTT)誘導(dǎo)8小時,以構(gòu)建ERS模型。通過檢測葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78(glucose regulated protein,GRP78)的表達(dá),判斷是否構(gòu)建成功。提前給予10~(-8)mol/l的17-β雌二醇(17β-estradiol,E_2)預(yù)處理1小時,量化分析GRP78的變化,以探索E_2對ERS的作用。2分別用TM/DTT誘導(dǎo)HUVEC 6小時,Western blot檢測ERS的三條主要信號通路蛋白,包括蛋白激酶R樣內(nèi)質(zhì)網(wǎng)激酶(protein kinase R-like ER kinase,PERK)、轉(zhuǎn)錄激活因子-6(activating transcription factor 6,ATF6)及需肌醇酶1(inositol-requiring enzyme 1,IRE1)通路蛋白的變化,以探索ERS最主要的信號通路,并進(jìn)一步明確雌激素的抑制作用。3分別用TM/DTT誘導(dǎo)HUVEC10小時/8小時,Western blot檢測ERS凋亡標(biāo)志蛋白——C/EBP-同源蛋白(C/EBP-homologous protein,CHOP)的變化。TM/DTT誘導(dǎo)HUVEC 12小時,用Hochest染色檢測細(xì)胞的凋亡率,探索E_2對ERS凋亡的抑制作用。4分別添加10-7mol/l特異性E_2受體拮抗劑ICI182,780和G15,檢測磷酸化的PERK/PERK(p-PERK/PERK)的表達(dá),探索雌激素受體在其抑制ERS中的作用。5分別添加10-5mol/l信號通路阻斷劑,包括LY294002、SB203580、SP600125和U0126,檢測p-PERK/PERK的表達(dá),探索雌激素抑制ERS的過程中激活的最主要的受體后信號通路。結(jié)果:1 TM(10小時)/DTT(8小時)誘導(dǎo)的HUVEC ERS組GRP78的表達(dá)量顯著上調(diào),而10~(-8)mol/l的E_2可顯著抑制其上調(diào);2 TM(6小時)/DTT(6小時)誘導(dǎo)的HUVEC ERS組,三條信號通路蛋白表達(dá)均明顯上調(diào),其中PERK信號通路的蛋白上調(diào)最顯著,而10~(-8)mol/l的E_2可顯著抑制其上調(diào);3 TM(10小時)/DTT(8小時)誘導(dǎo)的HUVEC ERS組,CHOP的表達(dá)量顯著上調(diào),且TM(12小時)/DTT(12小時)誘導(dǎo)組細(xì)胞ERS凋亡率顯著增加,而10~(-8)mol/l E_2的預(yù)處理使上調(diào)明顯回復(fù),凋亡細(xì)胞減少;4 E_2有顯著抑制p-PERK/PERK上調(diào)的作用,而E_2的保護(hù)作用可分別被ICI182,780和G15阻斷,同時添加ICI182,780和G15時阻斷作用最顯著;5 LY294002、SB203580、SP600125和U0126均可減弱E_2抑制p-PERK/PERK上調(diào)的作用。LY294002——磷脂酰肌醇-3羥基激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)的阻斷劑的作用最顯著,而其本身對p-PERK/PERK的表達(dá)無顯著影響。結(jié)論:1雌激素可以通過抑制PERK通路引起的ERS凋亡,保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞,以達(dá)到防止動脈粥樣硬化,保護(hù)心血管系統(tǒng)的作用。2雌激素抑制ERS的機(jī)制主要是通過活化的雌激素受體激活PI3K-Akt信號通路實現(xiàn)的。
【關(guān)鍵詞】：內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激 細(xì)胞凋亡 雌激素受體后信號通路 動脈粥樣硬化 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R54;R711.75
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-8
• 英文縮寫8-10
• 前言10-12
• 材料與方法12-17
• 結(jié)果17-19
• 附圖19-26
• 討論26-29
• 結(jié)論29-30
• 參考文獻(xiàn)30-34
• 綜述 雌激素防止動脈粥樣硬化的機(jī)制探討34-44
• 參考文獻(xiàn)40-44
• 致謝44-45
• 個人簡介45

【相似文獻(xiàn)】

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本文編號：335280