【目的】闡明PLIN2與SREBP2的關(guān)系,探討PLIN2在巨噬細胞中促進脂質(zhì)蓄積的機制�！痉椒ā渴紫�,使用50mg/L Ox-LDL與RAW264.7巨噬細胞孵育不同的時間,用Western blot檢測細胞內(nèi)PLIN2以及SREBP2的蛋白含量;其次,利用細胞轉(zhuǎn)染技術(shù)分別使PLIN2沉默表達、PLIN2過表達后,加入50mg/L Ox-LDL處理細胞24小時,用Western blot檢測細胞內(nèi)SREBP2及其靶基因HMGCR的蛋白變化情況,使用油紅O染色來觀察細胞內(nèi)的脂質(zhì)蓄積變化;再次,沉默表達和過表達PLIN2后,用游離膽固醇檢測試劑盒檢測細胞內(nèi)游離膽固醇含量變化,Western blot檢測細胞內(nèi)GRP78蛋白含量變化,細胞免疫熒光技術(shù)觀察細胞內(nèi)SREBP2蛋白的核轉(zhuǎn)位;最后,使用內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激抑制劑4-PBA預(yù)處理細胞2小時后,檢測荷脂巨噬細胞內(nèi)SREBP2以及HMGCR的蛋白含量變化。【結(jié)果】用50mg/L Ox-LDL處理RAW264.7巨噬細胞不同時間后,PLIN2的表達隨著孵育時間延長而增加。同時,SREBP2的表達則先增加于24小時達到最高值,然后減少。與對照組相比,... 

【文章來源】：南華大學(xué)湖南省

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

Ox-LDL對巨噬細胞PLIN2以及SREBP2蛋白表達的影響

圖 1.2 Ox-LDL 處理 RAW264.7 巨噬細胞不同時間細胞的生長狀態(tài)（×100）A 圖：0h; B 圖：24h； C 圖：48h4.2 過表達 PLIN2 對荷脂 RAW264.7 巨噬細胞中 SREBP2、HMGCR 蛋白表達的影響將保存的 pQCXIP 和 pQCXIP-HA-PLIN2 進行質(zhì)粒擴增和抽提。紫外分光光度計顯示 pQCXIP 和 pQCXIP-HA-PLIN2 的濃度分別為 1.1μg/μL 以及 1.25μg/μL。使用 lip6000TM轉(zhuǎn)染試劑分別將 pQCXIP 和 pQCXIP-HA-PLIN2 表達載體轉(zhuǎn)染入RAW264.7 細胞。將細胞分為 4 組，對照組、Ox-LDL 組、PQCXIP 以及PQCXIP-HA-PLIN2 加入 Ox-LDL（50mg/L）處理 24 小時組。處理后對細胞內(nèi)總蛋白進行提取，Western blot 檢測細胞在荷脂狀態(tài)下 PLIN2、SREBP2 以及

圖 2 過表達 PLIN2 對荷脂 RAW264.7 巨噬細胞中 SREBP2、HMGCR 蛋白表達的影響*表示與 control 組相比，p＜0.05；#表示與 PLIN2 過表達組相比，P＜0.05；&表示與 Ox-LDL組相比，p＜0.05 （n=3）4.3 沉默表達 PLIN2 對荷脂 RAW264.7 巨噬細胞中 SREBP2、HMGCR 蛋白表達的影響將保存的pSuper-retro-scramble siRNA和pSuper-retro-PLIN2 siRNA進行質(zhì)粒擴增和抽提。紫外分光光度計結(jié)果顯示 pSuper-retro-scramble siRNA 和pSuper-retro-PLIN2 siRNA 的濃度分別為 0.7μg/μL 以及 0.9μg/μL。分別將pSuper-retro-scramble siRNA 和 pSuper-retro-PLIN2 siRNA 表達載體轉(zhuǎn)染入

【參考文獻】：
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