動脈粥樣硬化（Atherosclerosis,AS）是一種以大中型動脈血管壁脂質(zhì)積累為特征的慢性炎癥性病變。脂質(zhì)代謝的紊亂導致脂質(zhì)在血管內(nèi)膜的積累,尤其是低密度脂蛋白（low-density lipoprotein,LDL）的積累是動脈粥樣硬化病變發(fā)展的始動因素。血漿中LDL主要是通過低密度脂蛋白受體（low density lipoprotein receptor,LDLR）攝入細胞而進行代謝。LDL/LDLR途徑是負反饋調(diào)節(jié)系統(tǒng),其在維持血漿和細胞內(nèi)脂質(zhì)穩(wěn)態(tài)中起重要作用。脂噬是一種新的選擇性自噬,其可通過自噬體選擇性識別脂質(zhì)并將其運送到溶酶體降解來調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝。脂噬在清除過量脂質(zhì),維持細胞穩(wěn)態(tài)和預防AS進展中發(fā)揮重要作用。前蛋白轉(zhuǎn)化酶枯草溶菌素9（proprotein convertase subtilisin kexin type 9,PCSK9）是一個與脂質(zhì)代謝調(diào)節(jié)密切相關的基因,其通過介導細胞表面的LDLR的降解來參與脂質(zhì)代謝。那么,脂噬是否可能通過調(diào)節(jié)PCSK9的表達影響LDLR的表達,從而調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝。因此,本課題旨在探討Hep G2細胞脂噬對PCSK9-LDLR降解途徑... 

【文章來源】：南華大學湖南省

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【學位級別】：碩士

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LDL處理24h對HepG2細胞荷脂的影響（×400）

南華大學碩士學位論文20圖4.2LDL處理HepG2細胞24h后細胞荷脂情況（×400）4.2細胞免疫熒光檢測LDL對HepG2細胞膜表面LDLR的影響為了驗證LDL處理是否會引起LDLR負反饋效應。我們進行了細胞膜上LDLR免疫熒光檢測。將HepG2細胞培養(yǎng)于24孔板中，待細胞貼壁后，用PBS緩沖液清洗2次，更換無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)12小時。PBS緩沖液清洗2次，換10%血清培養(yǎng)基培養(yǎng)，用100μg/mlLDL處理HepG2細胞24小時。觀察實驗我們發(fā)現(xiàn)，與Control組比較，Starvation組細胞膜上的紅色熒光增強，LDL處理組細胞膜上的紅色熒光減弱（圖4.3）。表明LDL處理能夠明顯降低HepG2細胞膜上LDLR的表達，引起負反饋效應。

第四章實驗結果21圖4.3LDL處理24h對HepG2細胞膜上LDLR的影響（×400）4.3LDL對HepG2細胞脂噬的影響4.3.1LDL對HepG2細胞LC3、P62、LAMP1蛋白表達的影響為了觀察LDL對HepG2細胞脂噬的影響。本實驗探討了LDL對LC3、P62、LAMP1的影響。自噬主要由三個連續(xù)的步驟組成，包括自噬體的形成，自噬體底物向溶酶體的運輸和自噬溶酶體的降解。LC3是脂噬的標志蛋白，當脂噬被誘導時，胞質(zhì)LC3-I與磷脂酰乙醇胺結合，形成LC3-II并定位于自噬體膜上，其含量的多少與自噬體數(shù)量呈正相關。因此，LC3-II可反映脂噬活性。P62作為脂噬的底物，其表達水平與脂噬活性呈負相關。P62水平的降低可反映脂噬活性增強，相反，P62的增加提示脂噬、溶酶體降解途徑被抑制。LAMP1是自噬溶酶體的標志蛋白。用100μg/mlLDL處理HepG2細胞24小時后，Westernblot檢測LC3-II、P62、LAMP1的蛋白表達。結果顯示，與Control組比較，Starvation組LC3-II表達水平增高，LAMP1表達水平降低，P62的蛋白表達無統(tǒng)計學意義，這可能是因為自噬體和溶酶體結合受阻或自噬溶酶體降解功能下降所導致。LDL處理組LC3-II、LAMP1表達水平增高，P62表達水平降低，表明LDL能誘導脂


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