LDL/LDLR負(fù)反饋調(diào)節(jié)新機(jī)制：脂噬介導(dǎo)的PCSK9-LDLR降解途徑
發(fā)布時(shí)間：2021-08-13 04:13
動(dòng)脈粥樣硬化（Atherosclerosis,AS）是一種以大中型動(dòng)脈血管壁脂質(zhì)積累為特征的慢性炎癥性病變。脂質(zhì)代謝的紊亂導(dǎo)致脂質(zhì)在血管內(nèi)膜的積累,尤其是低密度脂蛋白（low-density lipoprotein,LDL）的積累是動(dòng)脈粥樣硬化病變發(fā)展的始動(dòng)因素。血漿中LDL主要是通過低密度脂蛋白受體（low density lipoprotein receptor,LDLR）攝入細(xì)胞而進(jìn)行代謝。LDL/LDLR途徑是負(fù)反饋調(diào)節(jié)系統(tǒng),其在維持血漿和細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)穩(wěn)態(tài)中起重要作用。脂噬是一種新的選擇性自噬,其可通過自噬體選擇性識(shí)別脂質(zhì)并將其運(yùn)送到溶酶體降解來調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝。脂噬在清除過量脂質(zhì),維持細(xì)胞穩(wěn)態(tài)和預(yù)防AS進(jìn)展中發(fā)揮重要作用。前蛋白轉(zhuǎn)化酶枯草溶菌素9（proprotein convertase subtilisin kexin type 9,PCSK9）是一個(gè)與脂質(zhì)代謝調(diào)節(jié)密切相關(guān)的基因,其通過介導(dǎo)細(xì)胞表面的LDLR的降解來參與脂質(zhì)代謝。那么,脂噬是否可能通過調(diào)節(jié)PCSK9的表達(dá)影響LDLR的表達(dá),從而調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝。因此,本課題旨在探討Hep G2細(xì)胞脂噬對(duì)PCSK9-LDLR降解途徑...
【文章來源】：南華大學(xué)湖南省
【文章頁(yè)數(shù)】：79 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
LDL處理24h對(duì)HepG2細(xì)胞荷脂的影響（×400）
南華大學(xué)碩士學(xué)位論文20圖4.2LDL處理HepG2細(xì)胞24h后細(xì)胞荷脂情況（×400）4.2細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)LDL對(duì)HepG2細(xì)胞膜表面LDLR的影響為了驗(yàn)證LDL處理是否會(huì)引起LDLR負(fù)反饋效應(yīng)。我們進(jìn)行了細(xì)胞膜上LDLR免疫熒光檢測(cè)。將HepG2細(xì)胞培養(yǎng)于24孔板中，待細(xì)胞貼壁后，用PBS緩沖液清洗2次，更換無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)12小時(shí)。PBS緩沖液清洗2次，換10%血清培養(yǎng)基培養(yǎng)，用100μg/mlLDL處理HepG2細(xì)胞24小時(shí)。觀察實(shí)驗(yàn)我們發(fā)現(xiàn)，與Control組比較，Starvation組細(xì)胞膜上的紅色熒光增強(qiáng)，LDL處理組細(xì)胞膜上的紅色熒光減弱（圖4.3）。表明LDL處理能夠明顯降低HepG2細(xì)胞膜上LDLR的表達(dá)，引起負(fù)反饋效應(yīng)。
第四章實(shí)驗(yàn)結(jié)果21圖4.3LDL處理24h對(duì)HepG2細(xì)胞膜上LDLR的影響（×400）4.3LDL對(duì)HepG2細(xì)胞脂噬的影響4.3.1LDL對(duì)HepG2細(xì)胞LC3、P62、LAMP1蛋白表達(dá)的影響為了觀察LDL對(duì)HepG2細(xì)胞脂噬的影響。本實(shí)驗(yàn)探討了LDL對(duì)LC3、P62、LAMP1的影響。自噬主要由三個(gè)連續(xù)的步驟組成，包括自噬體的形成，自噬體底物向溶酶體的運(yùn)輸和自噬溶酶體的降解。LC3是脂噬的標(biāo)志蛋白，當(dāng)脂噬被誘導(dǎo)時(shí)，胞質(zhì)LC3-I與磷脂酰乙醇胺結(jié)合，形成LC3-II并定位于自噬體膜上，其含量的多少與自噬體數(shù)量呈正相關(guān)。因此，LC3-II可反映脂噬活性。P62作為脂噬的底物，其表達(dá)水平與脂噬活性呈負(fù)相關(guān)。P62水平的降低可反映脂噬活性增強(qiáng)，相反，P62的增加提示脂噬、溶酶體降解途徑被抑制。LAMP1是自噬溶酶體的標(biāo)志蛋白。用100μg/mlLDL處理HepG2細(xì)胞24小時(shí)后，Westernblot檢測(cè)LC3-II、P62、LAMP1的蛋白表達(dá)。結(jié)果顯示，與Control組比較，Starvation組LC3-II表達(dá)水平增高，LAMP1表達(dá)水平降低，P62的蛋白表達(dá)無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這可能是因?yàn)樽允审w和溶酶體結(jié)合受阻或自噬溶酶體降解功能下降所導(dǎo)致。LDL處理組LC3-II、LAMP1表達(dá)水平增高，P62表達(dá)水平降低，表明LDL能誘導(dǎo)脂
本文編號(hào)：3339720
【文章來源】：南華大學(xué)湖南省
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【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
LDL處理24h對(duì)HepG2細(xì)胞荷脂的影響（×400）
南華大學(xué)碩士學(xué)位論文20圖4.2LDL處理HepG2細(xì)胞24h后細(xì)胞荷脂情況（×400）4.2細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)LDL對(duì)HepG2細(xì)胞膜表面LDLR的影響為了驗(yàn)證LDL處理是否會(huì)引起LDLR負(fù)反饋效應(yīng)。我們進(jìn)行了細(xì)胞膜上LDLR免疫熒光檢測(cè)。將HepG2細(xì)胞培養(yǎng)于24孔板中，待細(xì)胞貼壁后，用PBS緩沖液清洗2次，更換無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)12小時(shí)。PBS緩沖液清洗2次，換10%血清培養(yǎng)基培養(yǎng)，用100μg/mlLDL處理HepG2細(xì)胞24小時(shí)。觀察實(shí)驗(yàn)我們發(fā)現(xiàn)，與Control組比較，Starvation組細(xì)胞膜上的紅色熒光增強(qiáng)，LDL處理組細(xì)胞膜上的紅色熒光減弱（圖4.3）。表明LDL處理能夠明顯降低HepG2細(xì)胞膜上LDLR的表達(dá)，引起負(fù)反饋效應(yīng)。
第四章實(shí)驗(yàn)結(jié)果21圖4.3LDL處理24h對(duì)HepG2細(xì)胞膜上LDLR的影響（×400）4.3LDL對(duì)HepG2細(xì)胞脂噬的影響4.3.1LDL對(duì)HepG2細(xì)胞LC3、P62、LAMP1蛋白表達(dá)的影響為了觀察LDL對(duì)HepG2細(xì)胞脂噬的影響。本實(shí)驗(yàn)探討了LDL對(duì)LC3、P62、LAMP1的影響。自噬主要由三個(gè)連續(xù)的步驟組成，包括自噬體的形成，自噬體底物向溶酶體的運(yùn)輸和自噬溶酶體的降解。LC3是脂噬的標(biāo)志蛋白，當(dāng)脂噬被誘導(dǎo)時(shí)，胞質(zhì)LC3-I與磷脂酰乙醇胺結(jié)合，形成LC3-II并定位于自噬體膜上，其含量的多少與自噬體數(shù)量呈正相關(guān)。因此，LC3-II可反映脂噬活性。P62作為脂噬的底物，其表達(dá)水平與脂噬活性呈負(fù)相關(guān)。P62水平的降低可反映脂噬活性增強(qiáng)，相反，P62的增加提示脂噬、溶酶體降解途徑被抑制。LAMP1是自噬溶酶體的標(biāo)志蛋白。用100μg/mlLDL處理HepG2細(xì)胞24小時(shí)后，Westernblot檢測(cè)LC3-II、P62、LAMP1的蛋白表達(dá)。結(jié)果顯示，與Control組比較，Starvation組LC3-II表達(dá)水平增高，LAMP1表達(dá)水平降低，P62的蛋白表達(dá)無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這可能是因?yàn)樽允审w和溶酶體結(jié)合受阻或自噬溶酶體降解功能下降所導(dǎo)致。LDL處理組LC3-II、LAMP1表達(dá)水平增高，P62表達(dá)水平降低，表明LDL能誘導(dǎo)脂
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