目的:構(gòu)建動脈粥樣硬化動物模型,探究動脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展的不同階段時RNF10（環(huán)指蛋白10）表達水平的動態(tài)變化以及平滑肌細胞生物學(xué)特性的變化情況。方法:選取ApoE基因敲除鼠（ApoE-/-）共24只,采用空氣干燥法損傷小鼠的頸動脈并以高脂飼料進行飼養(yǎng),誘導(dǎo)動脈粥樣硬化的形成。將24只小鼠中隨機分為A、B、C、D四組（每組6只）,其中A組作為正常對照組（小鼠不做頸動脈損傷處理并采用普通飼料飼養(yǎng)）,B組小鼠在頸動脈損傷后采用高脂飼料連續(xù)喂養(yǎng)8周,C組小鼠在頸動脈損傷后采用高脂飼料連續(xù)喂養(yǎng)12周,D組小鼠在頸動脈損傷后采用高脂飼料連續(xù)喂養(yǎng)16周。在各時間點處死小鼠,分離平滑肌細胞并進行原代培養(yǎng)。頸動脈樣本進行HE染色和油紅O染色并觀察,采用免疫組化檢測RNF10、SMA、SMHC、VEGF的表達情況。采用免疫熒光對細胞進行鑒定,CCK8實驗檢測各組細胞的增殖活性,流式細胞術(shù)檢測細胞周期及凋亡情況,采用劃痕實驗來檢測各組細胞遷移能力的變化,蛋白免疫印跡法檢測平滑肌細胞中RNF10、SMA和SMHC蛋白的表達水平,細胞免疫熒光檢測各組平滑肌細胞表型的變化情況。結(jié)果:HE實驗結(jié)果顯示B組樣本中... 

【文章來源】：南昌大學(xué)江西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

四組組織樣本的HE染色結(jié)果；第一行為鏡下20X觀察結(jié)果,第二行為同一視野鏡下40X觀察結(jié)果

第3章結(jié)果15染色，視野中染色面積占總面積的比率為30%；C組中脂質(zhì)沉積明顯，有大量染色區(qū)域，視野中染色面積占總面積的比率為60%；D組中出現(xiàn)局部深染色，視野中染色面積占總面積的比率約為90%。圖2各組動脈組織的冰凍油紅O染色結(jié)果；第一行為鏡下10X視野所見,第二行為同一視野鏡下20X觀察結(jié)果。3.3免疫組織化學(xué)染色結(jié)果各組免疫組化染色結(jié)果見圖3。A組中可見組織內(nèi)RNF10、SMA和SMHC染色強陽性，VEGF染色陰性。B組斑塊組織內(nèi)RNF10、SMA和SMHC染色陽性，VEGF染色陽性。C組中組織內(nèi)SMA和SMHC染色弱陽性，VEGF染色強陽性。D組中組織內(nèi)SMA和SMHC染色陽性，VEGF染色陽性。各指標(biāo)在各組中的具體染色評分見表1。據(jù)陽性染色物質(zhì)的定位，可見RNF10主要存在于泡沫細胞、巨噬細胞、平滑肌細胞及內(nèi)皮細胞內(nèi)。結(jié)果提示：隨著粥樣硬化程度加深，RNF10在斑塊內(nèi)的表達呈現(xiàn)逐漸下降然后趨于穩(wěn)定的趨勢，SMA和SMHC在AS進程中，其在平滑肌細胞內(nèi)的表達呈現(xiàn)出逐漸下降然后小幅度上升的趨勢。RNF10、SMA和SMHC的免疫組化結(jié)果見圖3。

第3章結(jié)果16表1各組細胞中各個指標(biāo)的免疫組化染色評分結(jié)果groupRNF10SMASMHCVEGFA10.6±1.111.0±0.410.5±0.62.5±0.4B6.2±0.57.6±0.57.8±0.48.6±0.8C4±0.65.7±0.74.9±0.811.2±0.5D5.2±0.88.2±0.67.5±0.57.9±1.2細胞胞漿或者細胞核染色深黃或棕色作為染色陽性，分?jǐn)?shù)在0～3分判定為陰性，4～6分為弱陽性，6-9分為陽性，9-12則判定為強陽性，分?jǐn)?shù)越高代表靶基因表達程度越高。圖3四組組織樣本的RNF10、SMA、SMHC和VEGF指標(biāo)免疫組化結(jié)果3.4SMC原代細胞鑒定通過免疫熒光技術(shù)檢測SMC細胞特異性蛋白α-SMA的表達，結(jié)果如圖1所示，在細胞上檢測到α-SMA的表達，表明該細胞為SMC細胞。免疫熒光技

【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
[1]RNF10對代謝紊亂大鼠頸動脈再狹窄的作用和機制研究[D]. 余貴泉.重慶醫(yī)科大學(xué) 2018

碩士論文
[1]Apoe和Ldlr基因敲除大鼠動脈粥樣硬化疾病模型的構(gòu)建及其表型比較研究[D]. 趙永亮.華東師范大學(xué) 2016



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