背景:心血管疾�。–ardiovascular disease,CVD）是一類嚴(yán)重威脅人類健康的重大疾病。由于心肌細(xì)胞難以再生,細(xì)胞替代治療是未來用于治療CVD的重要手段之一,而心肌細(xì)胞的來源和質(zhì)量是實現(xiàn)細(xì)胞替代治療的關(guān)鍵。誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（Induced pluripotent stem cells,iPS）及其體外定向分化為心肌細(xì)胞（Induced pluripotent stem cells derived cardiomyocytes,iPS-CM）技術(shù)的出現(xiàn),為研究心血管疾病、藥物心臟毒性、治療心肌損傷及心臟再生醫(yī)學(xué)等帶來了希望。盡管研究者們嘗試了多種方法體外誘導(dǎo)人誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（Human induced pluripotent stem cells,hiPS）向心肌細(xì)胞（Cardiomyocytes,CM）定向分化,但尚存在著不同細(xì)胞系間分化效率不穩(wěn)定、分化體系復(fù)雜、培養(yǎng)體系價格昂貴等缺陷。目前體外分化獲得的hiPS-CM是多種亞型心肌細(xì)胞的混合群體,有必要建立一種單細(xì)胞培養(yǎng)體系為hiPS-CM表型分析、單細(xì)胞測序、細(xì)胞治療等相關(guān)研究及應(yīng)用提供細(xì)胞來源。研究方法:1.首先對... 

【文章來源】：浙江理工大學(xué)浙江省

【文章頁數(shù)】：79 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

biPS和hES的AP染

分化方法的基礎(chǔ)上，通過調(diào)整了小分子抑制劑ＣＨＩＲ９９０２１和ＩＷＰ２的處理時間和濃度，建??立了優(yōu)化的心肌細(xì)胞誘導(dǎo)分化體系。以細(xì)胞的搏動面積作為觀察指標(biāo)，誘導(dǎo)效率從最初只??有少量的球形點狀搏動細(xì)胞到全盤整片搏動，幾乎１００％細(xì)胞發(fā)生搏動。圖２．５結(jié)果顯示，??ＣＨＩＲ９９０２１濃度為６卜ｉＭ，?ＩＷＰ２濃度為３噸／ｍＬ?（６．５?ｐＭ）且處理３?ｄ時搏動的心肌細(xì)胞??面積最大。??ｈｉＰＳ和ｈＥＳ體外心肌細(xì)胞誘導(dǎo)分化的階段可分如圖２．６所示，ｄ０為人ＰＳＣ未分化階??段；ｄ０－ｄ２為分化中胚層階段；ｄ２－ｄ５為心肌祖細(xì)胞階段；ｄ５－ｄ７為心肌前體細(xì)胞階段；??ｈＰＳＣ開始分化時，細(xì)胞形態(tài)不斷發(fā)生變化，第１－２?ｄ出現(xiàn)較多細(xì)胞死亡，隨著分化進(jìn)行，??周邊不斷長出新的細(xì)胞；在分化的第８?ｄ，細(xì)胞出現(xiàn)局部小造型地搏動，繼而小灶型搏動??越來越多，到第１０?ｄ左右，形成成片的單層搏動細(xì)胞。??２０??

?ｄｌＳ??ｍｍ?ｉｍ??圖２．６?ｈｉＰＳ分化為心肌細(xì)胞流程圖??Ｆｉｇ?２．６?Ｏｕｔｌｉｎｅ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｍｅｔｈｏｄ?ｆｏｒ?ｈｕｍａｎ?ｉＰＳ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅ?ｉｎｔｏ?ｃａｒｄｉｏｍｙｏｃｙｔｅｓ??３．３?ｈｉＰＳ－ＣＭ?和?ｈＥＳ－ＣＭ?的鑒定??２１??


本文編號：3326713