Cdc42在泡沫細(xì)胞形成和動脈粥樣硬化中的作用
發(fā)布時間：2021-07-19 21:27
研究背景:動脈粥樣硬化（Atherosclerosis,AS）是一類以血管內(nèi)膜下脂質(zhì)異常堆積為特征的慢性炎性疾病,可誘發(fā)中風(fēng),心肌梗死,外周血管疾病,腎臟疾病等嚴(yán)重病變。巨噬細(xì)胞在病變部位局灶性聚集激活、吞噬低密度脂蛋白形成泡沫細(xì)胞是動脈粥樣硬化形成過程中的關(guān)鍵一環(huán),但其具體發(fā)病機制尚未完全清晰。據(jù)報道,在炎癥反應(yīng)過程中,Cdc42活化參與了巨噬細(xì)胞的遷移與吞噬,然而,Cdc42在動脈粥樣硬化巨噬細(xì)胞激活和泡沫細(xì)胞形成中的作用未見詳細(xì)報道。本文利用巨噬細(xì)胞特異性敲除Cdc42基因小鼠探討巨噬細(xì)胞Cdc42對動脈粥樣硬化的影響和作用機制。實驗方法:1.利用ApoE缺失小鼠與Lyz2Cre小鼠（髓系特異性表達(dá)Cre重組酶小鼠）或Cdc42fl/fl小鼠交配,子代交配多代得到目的小鼠即ApoE缺失背景下髓系特異性敲除Cdc42小鼠2.建立動脈粥樣硬化模型:將8周齡大小Cdc42敲除小鼠與對照小鼠進(jìn)行致動脈粥樣硬化飲食（D12108C）連續(xù)喂養(yǎng)16周;每周記錄小鼠體重變化情況。3.喂養(yǎng)16周后分離小鼠主動脈,進(jìn)行油紅染色,觀察斑塊形成情況,檢測血清中膽固醇、甘油三酯、HD...
【文章來源】：南昌大學(xué)江西省 211工程院校
【文章頁數(shù)】：62 頁
【學(xué)位級別】：碩士
【部分圖文】：
巨噬細(xì)胞脂蛋白攝取和流出的機制[12]
第2章材料與方法7圖2.2小鼠交配策略2.1.2小鼠基因型鑒定（1）小鼠基因組DNA提取1）對所需鑒定小鼠進(jìn)行編號，剪取合適長度的腳趾或小鼠尾尖置于1.5mLEP管中并標(biāo)注對應(yīng)編號。2）向EP管中加入100μLLysisbufferA，置于95℃金屬浴中孵育1小時。3）向EP管中加入100μLLysisbufferB，混勻離心，上清中即含有DNA模板（2）小鼠基因型鑒定1）根據(jù)表2.1混制PCR擴(kuò)增體系表2.1PCR擴(kuò)增體系Cdc42、Cre擴(kuò)增體系A(chǔ)poE擴(kuò)增體系試劑體積試劑體積2×Taq酶7μL2×Taq酶6μLForwardPrimer（10μM）0.5μLCommonPrimer（10μM）0.3μLReversePrimer0.5μLWildTypeReverse0.3μL雜交多代ApoE-/-Cdc42fl/flCre+ApoE+/-Cdc42fl/+Cre+ApoE+/-Cdc42fl/+Cre-ApoE-/-Cdc42fl/flCre+ApoE-/-Cdc42fl/flCre-
第3章實驗結(jié)果24第3章實驗結(jié)果3.1構(gòu)建ApoE缺陷背景下巨噬細(xì)胞特異性敲除Cdc42轉(zhuǎn)基因小鼠按照如前所述的交配策略，獲得ApoE缺陷背景下巨噬細(xì)胞特異性敲除Cdc42C57BL/6轉(zhuǎn)基因小鼠（ApoE-/-Cdc42fl/flLyz2cre+），為確定獲取轉(zhuǎn)基因小鼠為實驗?zāi)康氖螅覀兎謩e從DNA、RNA、蛋白質(zhì)水平確定小鼠基因型。3.1.1基因型鑒定ApoE-/-&Cdc42雙敲小鼠如前圖2.1所示，Cdc42flox等位基因擴(kuò)增片段大小為412bp，Cdc42野生型等位基因擴(kuò)增片段大小為206bp；ApoE突變型等位基因擴(kuò)增片段大小為250bp，ApoE野生型等位基因擴(kuò)增片段大小為155bp；Cre重組酶擴(kuò)增片段大小為400bp（陽性）。依次混合PCR反應(yīng)體系，分別進(jìn)行PCR擴(kuò)增鑒定，鑒定結(jié)果如圖3.1所示。其中基因型為ApoE-/-Cdc42fl/flCre+（又稱FF+）為目的實驗敲除小鼠，基因型為ApoE-/-Cdc42fl/flCre-（又稱FF-）為實驗對照小鼠。圖3.1小鼠基因型鑒定
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]《中國心血管病報告2018》概要[J]. 胡盛壽,高潤霖,劉力生,朱曼璐,王文,王擁軍,吳兆蘇,李惠君,顧東風(fēng),楊躍進(jìn),鄭哲,陳偉偉. 中國循環(huán)雜志. 2019(03)
[2]mTOR-Cdc42信號通路對慢性阻塞性肺疾病小鼠肺泡巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響[J]. 王云潔,劉曉菊,黨苗苗,曾曉麗,包海榮. 中華醫(yī)學(xué)雜志. 2016 (46)
[3]動脈粥樣硬化發(fā)病的炎癥機制的研究進(jìn)展[J]. 劉俊田. 西安交通大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版). 2015(02)
碩士論文
[1]特異性敲除巨噬細(xì)胞Cdc42加重盲腸結(jié)扎穿刺（CLP）誘導(dǎo)的小鼠膿毒癥及其機制研究[D]. 鄭懷宇.南昌大學(xué) 2017
[2]巨噬細(xì)胞特異性敲除Cdc42基因加重細(xì)菌脂多糖LPS誘導(dǎo)的小鼠炎癥反應(yīng)[D]. 王媛.南昌大學(xué) 2016
本文編號：3291461
【文章來源】：南昌大學(xué)江西省 211工程院校
【文章頁數(shù)】：62 頁
【學(xué)位級別】：碩士
【部分圖文】：
巨噬細(xì)胞脂蛋白攝取和流出的機制[12]
第2章材料與方法7圖2.2小鼠交配策略2.1.2小鼠基因型鑒定（1）小鼠基因組DNA提取1）對所需鑒定小鼠進(jìn)行編號，剪取合適長度的腳趾或小鼠尾尖置于1.5mLEP管中并標(biāo)注對應(yīng)編號。2）向EP管中加入100μLLysisbufferA，置于95℃金屬浴中孵育1小時。3）向EP管中加入100μLLysisbufferB，混勻離心，上清中即含有DNA模板（2）小鼠基因型鑒定1）根據(jù)表2.1混制PCR擴(kuò)增體系表2.1PCR擴(kuò)增體系Cdc42、Cre擴(kuò)增體系A(chǔ)poE擴(kuò)增體系試劑體積試劑體積2×Taq酶7μL2×Taq酶6μLForwardPrimer（10μM）0.5μLCommonPrimer（10μM）0.3μLReversePrimer0.5μLWildTypeReverse0.3μL雜交多代ApoE-/-Cdc42fl/flCre+ApoE+/-Cdc42fl/+Cre+ApoE+/-Cdc42fl/+Cre-ApoE-/-Cdc42fl/flCre+ApoE-/-Cdc42fl/flCre-
第3章實驗結(jié)果24第3章實驗結(jié)果3.1構(gòu)建ApoE缺陷背景下巨噬細(xì)胞特異性敲除Cdc42轉(zhuǎn)基因小鼠按照如前所述的交配策略，獲得ApoE缺陷背景下巨噬細(xì)胞特異性敲除Cdc42C57BL/6轉(zhuǎn)基因小鼠（ApoE-/-Cdc42fl/flLyz2cre+），為確定獲取轉(zhuǎn)基因小鼠為實驗?zāi)康氖螅覀兎謩e從DNA、RNA、蛋白質(zhì)水平確定小鼠基因型。3.1.1基因型鑒定ApoE-/-&Cdc42雙敲小鼠如前圖2.1所示，Cdc42flox等位基因擴(kuò)增片段大小為412bp，Cdc42野生型等位基因擴(kuò)增片段大小為206bp；ApoE突變型等位基因擴(kuò)增片段大小為250bp，ApoE野生型等位基因擴(kuò)增片段大小為155bp；Cre重組酶擴(kuò)增片段大小為400bp（陽性）。依次混合PCR反應(yīng)體系，分別進(jìn)行PCR擴(kuò)增鑒定，鑒定結(jié)果如圖3.1所示。其中基因型為ApoE-/-Cdc42fl/flCre+（又稱FF+）為目的實驗敲除小鼠，基因型為ApoE-/-Cdc42fl/flCre-（又稱FF-）為實驗對照小鼠。圖3.1小鼠基因型鑒定
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]《中國心血管病報告2018》概要[J]. 胡盛壽,高潤霖,劉力生,朱曼璐,王文,王擁軍,吳兆蘇,李惠君,顧東風(fēng),楊躍進(jìn),鄭哲,陳偉偉. 中國循環(huán)雜志. 2019(03)
[2]mTOR-Cdc42信號通路對慢性阻塞性肺疾病小鼠肺泡巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響[J]. 王云潔,劉曉菊,黨苗苗,曾曉麗,包海榮. 中華醫(yī)學(xué)雜志. 2016 (46)
[3]動脈粥樣硬化發(fā)病的炎癥機制的研究進(jìn)展[J]. 劉俊田. 西安交通大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版). 2015(02)
碩士論文
[1]特異性敲除巨噬細(xì)胞Cdc42加重盲腸結(jié)扎穿刺（CLP）誘導(dǎo)的小鼠膿毒癥及其機制研究[D]. 鄭懷宇.南昌大學(xué) 2017
[2]巨噬細(xì)胞特異性敲除Cdc42基因加重細(xì)菌脂多糖LPS誘導(dǎo)的小鼠炎癥反應(yīng)[D]. 王媛.南昌大學(xué) 2016
本文編號：3291461
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