研究背景及目的:干細(xì)胞移植治療急性心肌梗死（Acute myocardial infarction,AMI）已成為全球研究的新趨勢。心臟干細(xì)胞（Cardiac Stem Cells,CSCs）具有再生修復(fù)梗死心肌,促進(jìn)新生血管形成,從而降低心肌梗死后梗死面積,改善梗死區(qū)域微循環(huán)作用,因此被認(rèn)為在治療MI方面具有強(qiáng)大的潛力。然而,CSCs移植治療MI仍遇到一些瓶頸問題,即CSCs移植至心肌梗死后惡劣微環(huán)境中干細(xì)胞存活力極低,分化增殖能力受抑制,不能有效的達(dá)到受損心肌再生修復(fù)的作用,因此目前認(rèn)為CSCs主要通過旁分泌機(jī)制,改善局部心肌梗死微環(huán)境,促進(jìn)心肌細(xì)胞存活及局部血管新生發(fā)揮作用。外泌體（Exosomes）是納米級(jí)的膜性封閉囊泡,其內(nèi)包含多種蛋白質(zhì)和核酸,成為細(xì)胞間傳遞信息的關(guān)鍵中介,而外泌體主要通過非編碼RNAs發(fā)揮效應(yīng),其中circRNAs因具有更好保守性,成為目前研究的熱點(diǎn)。隨著研究的深入,近來發(fā)現(xiàn)circRNAs中circHIPK3具有心臟保護(hù)及再生新生微血管的作用�，F(xiàn)已研究證實(shí)circHIPK3可促進(jìn)糖尿病視網(wǎng)膜血管的生成。另有研究報(bào)道過表達(dá)circHIPK3可抑制膀胱癌細(xì)胞... 

【文章來源】：遵義醫(yī)科大學(xué)貴州省

【文章頁數(shù)】：107 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

原代CSCs培養(yǎng)注：A：培養(yǎng)第3天（×100倍，標(biāo)尺=100μm）；B：培養(yǎng)第5天（×100倍，標(biāo)尺=100μm）；C：培養(yǎng)第7-8天（×100倍，標(biāo)尺=100μm）；D：培養(yǎng)第10天（×100倍，標(biāo)尺=100μm）

細(xì)胞密度達(dá) 50%左右（圖 2C）。培養(yǎng)至第 5 天，細(xì)胞繼續(xù)增殖，形態(tài)未見明顯變化，細(xì)胞融合可達(dá) 80%-90%（圖2D）。圖 2：MACS 分選后獲得的 c-kit+CSCs注：A：MACS 分選后立即觀察（×100 倍，標(biāo)尺=100μm）；B：MACS 分選后 1 天（×100 倍，標(biāo)尺=100μm）；C：MACS 分選后 3 天（×100 倍，標(biāo)尺=100μm）；D：MACS 分選后 5 天（×100 倍，標(biāo)尺=100μm）。2.2 MACS 分選獲得 c-kit+CSCs 的鑒定2.2.1 流式細(xì)胞術(shù)鑒定 c-kit+CSCs 表面標(biāo)記物 c-kit 的表達(dá)流式細(xì)胞術(shù)檢測 MACS 分選后心臟干細(xì)胞表面標(biāo)記物的表達(dá)情況，結(jié)果顯46

圖 3：流式細(xì)胞術(shù)鑒定 c-kit+CSCs 表面標(biāo)記物的表達(dá)情況2.2.2 細(xì)胞免疫熒光鑒定 c-kit+CSCs 表面標(biāo)記分子的表達(dá)經(jīng) MACS 分選獲得 CSCs 采用細(xì)胞免疫熒光技術(shù)鑒定其表面標(biāo)記分子 c-kit的表達(dá)情況，結(jié)果顯示，MACS 分選獲得 CSCs 表達(dá) c-kit 分子達(dá) 90%以上（圖 4）。圖 4：細(xì)胞免疫熒光鑒定經(jīng) MACS 分選后 CSCs 中 c-kit 分子的表達(dá)注：倒置熒光顯微鏡觀察 MACS 分選獲得 CSCs 表達(dá) c-kit 分子達(dá) 90%以上（×200 倍，標(biāo)尺=20μm）。2.3 c-kit+CSCs 來源 Exosomes 的濃度測定及鑒定

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Pro?ling and Validation of the Circular RNA Repertoire in Adult Murine Hearts[J]. Tobias Jakobi,Lisa F.Czaja-Hasse,Richard Reinhardt,Christoph Dieterich.  Genomics,Proteomics & Bioinformatics. 2016(04)



本文編號(hào)：3287594