糖尿病是一種嚴(yán)重威脅人類健康的慢性病,發(fā)病率逐年升高。糖尿病所致動(dòng)脈病變是糖尿病足截肢的直接病因,致殘、致死率高,嚴(yán)重影響居民健康,對(duì)社會(huì)經(jīng)濟(jì)造成巨大負(fù)擔(dān)。然而糖尿病所致動(dòng)脈病變機(jī)制未明,尚缺乏有效干預(yù)手段。糖尿病導(dǎo)致的動(dòng)脈內(nèi)皮損傷是糖尿病動(dòng)脈病變發(fā)生的前期病理過(guò)程。因此探討糖尿病動(dòng)脈內(nèi)皮損傷的發(fā)生機(jī)制、尋找有效的干預(yù)靶點(diǎn)對(duì)糖尿病動(dòng)脈病變的防治意義重大。氧化應(yīng)激是糖尿病致動(dòng)脈內(nèi)皮損傷的重要機(jī)制。核因子相關(guān)因子2（Nuclear factor erythroid 2-related factor 2,NRF2）是細(xì)胞抗氧化系統(tǒng)的核心調(diào)控因子,作為轉(zhuǎn)錄因子可進(jìn)入細(xì)胞核啟動(dòng)多種抗氧化基因轉(zhuǎn)錄,提高細(xì)胞抗氧化能力,對(duì)抗糖尿病引起的細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷。因此,激活NRF2是減輕糖尿病動(dòng)脈內(nèi)皮損傷的有效策略。Kelch-like ECH-associated protein 1（KEAP1）蛋白是NRF2的關(guān)鍵負(fù)調(diào)控因子。在細(xì)胞質(zhì)中,KEAP1與NRF2結(jié)合,阻止NRF2進(jìn)入細(xì)胞核發(fā)揮轉(zhuǎn)錄因子作用。此外,KEAP1還誘導(dǎo)NRF2經(jīng)蛋白酶體降解。由此可見(jiàn),抑制KEAP1是激活NRF2的有效手段。我們前期... 

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MiR-200a減輕糖尿病動(dòng)脈內(nèi)皮損傷的可能機(jī)制KEAP1，kelch-likeECH-associatedprotein1；NRF2：核因子相關(guān)因子2；HO1：人血紅素加氧酶1；NQO1：還原型輔酶/醌氧化還原酶1；ARE，抗氧化反應(yīng)元件

29圖 2.1 高糖對(duì)小鼠動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞的影響。高糖處理后不同時(shí)間點(diǎn)野生型小鼠動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞（2.1A）miR-200a，（2.1B）Keap1mRNA，（2.1C）KEAP1 蛋白，(2.1D)總 NRF2，（2.1E)細(xì)胞核內(nèi) NRF2，（2.1F）Ho1 和 Nqo1mRNA，（2.1G）ROS，MDA，Vcam-1mRNA 以及 Mcp-1mRNA；（H）上述各指標(biāo)總結(jié)為 heatmap。數(shù)據(jù)表示為均值±標(biāo)準(zhǔn)差。n=3，P < 0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。*, P < 0.05 vs NG; , P < 0.05vs HG 24 h。英文縮略詞：NG, normal glucose, 正常糖；M, mannitol, 甘露醇；ROS: reactive oxygenspecies，活性氧簇；MDA：malondialdehyde，丙二醛；Vcam-1：vascular cell-adhesion molecule-1，細(xì)胞間黏附分子-1；MCP-1：monocyte chemotactic protein 1，單核細(xì)胞趨化蛋白-1；GAPDH：glyceraldehyde phosphate dehydrogenase， 磷酸甘油醛脫氫酶；H3：Histone3，組蛋白 3。

31圖 2.2 應(yīng)用 miR-200a 模擬劑和抑制劑后相關(guān)指標(biāo)變化。（A）各組之間 miR-200a，（B）Keap1mRNA，（C）KEAP1 蛋白，(D 和 E)總 NRF2和細(xì)胞核內(nèi) NRF2，（F）Ho1 和 Nqo1mRNA，（G）ROS，MDA，Vcam-1 mRNA，Mcp-1 mRNA。數(shù)據(jù)表示為均值±標(biāo)準(zhǔn)差。n=3，P < 0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。*, P < 0.05 vs NG； , P < 0.05vs HG+NC-M ； , P < 0.05 vs HG+NC-I。英文縮略詞：同圖 2.1。2.4.3 KEAP1 在介導(dǎo) miR-200a 效應(yīng)中的作用為探討 KEAP1 在介導(dǎo) miR-200a 效應(yīng)中的作用，我們應(yīng)用高糖、Keap1 siRNA、miR-200a-M 共 處 理 野 生 型 小 鼠 動(dòng) 脈 內(nèi) 皮 細(xì) 胞 48 小 時(shí) ， 觀 察miR-200a/KEAP1/NRF2 通路相關(guān)表達(dá)、NRF2 下游基因 Ho1 和 Nqo1 mRNA、氧化


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