目的:觀察Ran結(jié)合蛋白M（RanBPM）對腎小管鈉-氯共同轉(zhuǎn)運子（NCC）蛋白表達(dá)及相關(guān)ERK1/2信號通路蛋白表達(dá)的影響。方法:免疫共沉淀檢測RanBPM蛋白與WNK4蛋白是否存在直接相互作用;觀察轉(zhuǎn)染RanBPM質(zhì)粒對EGF誘導(dǎo)細(xì)胞ERK1/2磷酸化的影響,通過轉(zhuǎn)染質(zhì)粒過表達(dá)RanBPM蛋白或siRNA抑制RanBPM基因,免疫蛋白印跡法檢測細(xì)胞內(nèi)源性NCC蛋白含量和ERK1/2磷酸化水平的變化。結(jié)果:免疫共沉淀實驗證實WNK4和RanBPM之間存在直接的相互作用。RanBPM可以抑制EGF誘導(dǎo)的ERK1/2磷酸化。RanBPM過表達(dá)可使細(xì)胞ERK1/2磷酸化減少（1.000±0.074 vs. 0.275±0.041,P<0.01）,而NCC蛋白表達(dá)增加（1.000±0.115 vs.1.470±0.105,P<0.01）。siRNA沉默RanBPM基因后,ERK1/2磷酸化增加（1.000±0.194 vs. 2.301±0.220,P<0.01）,NCC蛋白表達(dá)下降（1.000±0.223 vs. 0.556±0.132,P<0.01）。轉(zhuǎn)染RanB... 

【文章來源】：溫州醫(yī)科大學(xué)學(xué)報. 2020,50(07)

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【部分圖文】：

WNK4與RanBPM之間存在蛋白相互作用

結(jié)果顯示，0.3 ng/mL EGF處理HEK 293T細(xì)胞15 min后，ERK1/2磷酸化水平明顯增加，然而，在HEK 293T細(xì)胞轉(zhuǎn)染RanBPM的情況下，ERK1/2磷酸化水平呈現(xiàn)減少現(xiàn)象，證實RanBPM是ERK1/2磷酸化信號傳導(dǎo)通路的抑制劑。見圖2。2.3 RanBPM過表達(dá)對NCC蛋白含量和ERK1/2磷酸化水平的影響


本文編號：3263572