流式細胞術(shù)（flow cytometry）可以實現(xiàn)高速、逐一的細胞定量分析和分選,是研究和診斷血液病的重要手段之一。但是由于不同實驗所用細胞和實驗條件不同,經(jīng)常存在抗原陰性細胞非特異染色等問題。利用抗體滴定法,可通過計算、比較染色指數(shù),得到使抗原陽性細胞群和陰性細胞群達到最佳分離效果的實驗條件。為了優(yōu)化血液細胞流式細胞術(shù)中熒光抗體染色的實驗條件,以小鼠骨髓細胞為被標記細胞,選擇利用非串聯(lián)熒光染料FITC標記的大鼠抗小鼠CD11b抗體（FITC Rat Anti-Mouse CD11b）和串聯(lián)熒光染料APC-eFluor780標記的大鼠抗小鼠CD11b抗體（APC-eFluor780 Rat Anti-Mouse CD11b）進行標記。通過計算不同濃度抗體標記小鼠骨髓細胞的染色指數(shù)進行抗體滴定,確定合適的抗體濃度區(qū)間,進而分析細胞數(shù)量、染色時間及固定步驟對抗體染色指數(shù)的影響,探究影響血液細胞抗體染色的關(guān)鍵因素。結(jié)果顯示,FITC Rat Anti-Mouse CD11b和APC-eFluor780 Rat Anti-Mouse CD11b的濃度分別在0.156～2.500μg·mL

【文章來源】：生物技術(shù)進展. 2020,10(03)

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【部分圖文】：

抗體濃度對抗體染色指數(shù)的影響

可見即使是針對同一抗原表位的不同抗體,進行樣品標記的合適的細胞數(shù)量范圍也不盡一致。如本實驗中,非串聯(lián)熒光染料標記的抗體在一定范圍內(nèi)細胞數(shù)量的改變不會對染色效果有明顯的影響,而串聯(lián)熒光染料標記的抗體則對細胞數(shù)增加更為敏感�？傊�,無論是何種抗體,如果進行較多數(shù)量的細胞染色(如進行細胞分選),有必要對合適的抗體濃度重新進行滴定,以免影響染色效果。2.3 染色時間對抗體染色效果的影響

雖然染色后的新鮮標本立即進行流式細胞分析最為理想,但是有時受實驗安排及儀器所限,需要對樣本進行PFA固定后次日再進行分析。為了研究PFA固定步驟對細胞染色效果的影響,在細胞數(shù)量(1×106 cells·管-1)、抗體濃度(1.25 μg·mL-1)和染色時間(30 min)不變的情況下,比較了FITC Rat Anti-Mouse CD11b和APC-eFluor780 Rat Anti-Mouse CD11b抗體在PFA固定前后染色指數(shù)的變化。如圖4所示,FITC Rat Anti-Mouse CD11b抗體染色經(jīng)2% PFA固定24 h后,染色指數(shù)從25.34降為9.91,可見固定前后的染色效果顯著下降(P<0.01)。APC-eFluor780 Rat Anti-Mouse CD11b抗體染色經(jīng)2% PFA固定24 h后,染色指數(shù)從38.81降為24.86,固定步驟使染色效果顯著下降(P<0.05)�？梢�,PFA溶液固定會使非串聯(lián)熒光染料與串聯(lián)熒光染料抗體染色效果均顯著下降。3 討論

【參考文獻】：
期刊論文
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[3]以流式細胞術(shù)建立中國漢族健康兒童外周血淋巴細胞亞群相對計數(shù)的正常參考值[J]. 肖婧,申丹,劉永革,張新根,孫琳,吳喜蓉,焦偉偉,馮衛(wèi)星,苗青,顧藝,劉芳,張桂榮,申阿東.  中國循證兒科雜志. 2010(04)



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