發(fā)布時間：2021-06-23 06:43

　　研究背景和目的血管內(nèi)皮細(xì)胞是心血管系統(tǒng)的屏障和重要組成部分,在血管功能的調(diào)節(jié)以及穩(wěn)態(tài)的維持中發(fā)揮了重要作用。各種原因?qū)е卵軆?nèi)膜損傷后（如球囊擴張或冠狀動脈內(nèi)支架植入術(shù)后）,內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移修復(fù)受損部位,或者稱為再內(nèi)皮化的過程,在血管內(nèi)膜增生和動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展中起到了重要作用。因此,研究血管損傷后內(nèi)皮細(xì)胞的修復(fù)機制以及更有效地促進(jìn)血管內(nèi)膜的再內(nèi)皮化具有重要意義。IFI3 5（Interferon-induced protein 3 5,干擾素誘導(dǎo)蛋白3 5）是一種干擾素誘導(dǎo)蛋白,在免疫炎癥反應(yīng)中發(fā)揮了重要的作用。本研究的目的是探索IFI35是否可以影響內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移以及血管內(nèi)膜的再內(nèi)皮化。研究方法本研究中,我們首先通過過表達(dá)或者抑制IFI35之后,檢測人原代臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）的增殖和遷移速度,觀察IFI35對內(nèi)皮細(xì)胞增殖和遷移的影響。其次,通過缺失IFI35的不同結(jié)構(gòu)域以及雙熒光素酶報告實驗等,研究IFI35對于NF-κB/p65信號通路的影響,探索其潛在的作用機制。最后,通過建立小鼠... 

【文章來源】：浙江大學(xué)浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：111 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１．轉(zhuǎn)染過表達(dá)腺病毒和敲低ｓｉＲＮＡ效率驗證

染ＩＦＩ３５過表達(dá)腺病毒（Ａｄ－ＩＦＩ３５?）及其對照腺病毒（Ａｄ－ＲＦＰ?）、ＩＦＩ３５敲低ｓｉＲＮＡ??（ｓｉＲＮＡ－ＩＦＩ３５?）及其對照ｓｉＲＮＡ?（ｓｉ－ＮＣ?）?４８小時之后，進(jìn)行ＣＣＫ－８和Ｅｄｕ細(xì)??胞增殖檢測。如圖２和圖３所示，在內(nèi)皮細(xì)胞中升高ＩＦＩ３５的表達(dá)可以明顯抑制??內(nèi)皮細(xì)胞的增殖，相反，在抑制ＩＦＩ３５表達(dá)之后可以觀察到內(nèi)皮細(xì)胞的增殖能力??明顯升高。??０．５－｜?Ｉ￣＊￣．??０．４－?｜??Ｉ〇－３－?＾??■??０．１－?ｊ－＝ａ＝－ｊ?■??ｏ?丄Ｌ，．ｆｆ?—ｆ??３??圖２．ＣＣＫ－８細(xì)胞增殖實驗檢測過表達(dá)或者敲低ＩＦＩ３５后對內(nèi)皮細(xì)胞增殖能力??的影響＾?內(nèi)皮細(xì)胞轉(zhuǎn)染?Ａｄ－ＩＦＩ３５，?Ａｄ－ＲＦＰ，?ｓｉＲＮＡ－ＩＦＩ３５?以及?ｓｉ－ＮＣ４８ｈ?后，??進(jìn)行ＣＣＫ－８細(xì)胞增殖實驗，在酶標(biāo)儀上測定４５０?ｎｍ處的吸光度。統(tǒng)計數(shù)據(jù)來??自于三次獨立實驗，并以均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)誤（ｍｅａｎ±ＳＥＭ）表示，＊Ｐ＜０．０５。??Ａｄ－ＲＦＰ?Ａｄ－ＩＦＩ３５?ｓｉ＾Ｃ?ｓｉ＞ｌＲ３５?＊??－ＢＨＨＨ?ｉ?ｒＴ?ｉ??ＩＨＢ?ＩＢＭ?４〇－?■??■■■■??Ｈ■■圓?ｌｉ?１１?１１?１｜??ＩＨＢ?ＩＨＩＨ?Ａｄ－ＲＦＰ?ＭＡＦ＼３５?ｓ＾ＨＣ?ｓｉ－ＩＲ３５??圖３．Ｅｄｕ細(xì)胞增殖染色檢測過表達(dá)或者敲低ＩＦＩ３５后對內(nèi)皮細(xì)胞增殖能力的影??響。內(nèi)皮細(xì)胞轉(zhuǎn)染?Ａｄ－ＩＦＩ３５，?Ａｄ－ＲＦＰ，?ｓｉＲＮＡ－ＩＦＩ３５?以及?ｓｉ－ＮＣ４８ｈ?后，進(jìn)行?Ｅｄｕ??細(xì)胞增殖染色。Ｅｄｕ綠色熒光標(biāo)示處于增殖狀態(tài)的細(xì)胞

染ＩＦＩ３５過表達(dá)腺病毒（Ａｄ－ＩＦＩ３５?）及其對照腺病毒（Ａｄ－ＲＦＰ?）、ＩＦＩ３５敲低ｓｉＲＮＡ??（ｓｉＲＮＡ－ＩＦＩ３５?）及其對照ｓｉＲＮＡ?（ｓｉ－ＮＣ?）?４８小時之后，進(jìn)行ＣＣＫ－８和Ｅｄｕ細(xì)??胞增殖檢測。如圖２和圖３所示，在內(nèi)皮細(xì)胞中升高ＩＦＩ３５的表達(dá)可以明顯抑制??內(nèi)皮細(xì)胞的增殖，相反，在抑制ＩＦＩ３５表達(dá)之后可以觀察到內(nèi)皮細(xì)胞的增殖能力??明顯升高。??０．５－｜?Ｉ￣＊￣．??０．４－?｜??Ｉ〇－３－?＾??■??０．１－?ｊ－＝ａ＝－ｊ?■??ｏ?丄Ｌ，．ｆｆ?—ｆ??３??圖２．ＣＣＫ－８細(xì)胞增殖實驗檢測過表達(dá)或者敲低ＩＦＩ３５后對內(nèi)皮細(xì)胞增殖能力??的影響＾?內(nèi)皮細(xì)胞轉(zhuǎn)染?Ａｄ－ＩＦＩ３５，?Ａｄ－ＲＦＰ，?ｓｉＲＮＡ－ＩＦＩ３５?以及?ｓｉ－ＮＣ４８ｈ?后，??進(jìn)行ＣＣＫ－８細(xì)胞增殖實驗，在酶標(biāo)儀上測定４５０?ｎｍ處的吸光度。統(tǒng)計數(shù)據(jù)來??自于三次獨立實驗，并以均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)誤（ｍｅａｎ±ＳＥＭ）表示，＊Ｐ＜０．０５。??Ａｄ－ＲＦＰ?Ａｄ－ＩＦＩ３５?ｓｉ＾Ｃ?ｓｉ＞ｌＲ３５?＊??－ＢＨＨＨ?ｉ?ｒＴ?ｉ??ＩＨＢ?ＩＢＭ?４〇－?■??■■■■??Ｈ■■圓?ｌｉ?１１?１１?１｜??ＩＨＢ?ＩＨＩＨ?Ａｄ－ＲＦＰ?ＭＡＦ＼３５?ｓ＾ＨＣ?ｓｉ－ＩＲ３５??圖３．Ｅｄｕ細(xì)胞增殖染色檢測過表達(dá)或者敲低ＩＦＩ３５后對內(nèi)皮細(xì)胞增殖能力的影??響。內(nèi)皮細(xì)胞轉(zhuǎn)染?Ａｄ－ＩＦＩ３５，?Ａｄ－ＲＦＰ，?ｓｉＲＮＡ－ＩＦＩ３５?以及?ｓｉ－ＮＣ４８ｈ?后，進(jìn)行?Ｅｄｕ??細(xì)胞增殖染色。Ｅｄｕ綠色熒光標(biāo)示處于增殖狀態(tài)的細(xì)胞

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]《中國心血管病報告2016》概要[J]. 陳偉偉,高潤霖,劉力生,朱曼璐,王文,王擁軍,吳兆蘇,李惠君,顧東風(fēng),楊躍進(jìn),鄭哲,蔣立新,胡盛壽.  中國循環(huán)雜志. 2017(06)



本文編號：3244452