目的探討微小RNA-423-5p（miR-423-5p）對脂多糖（LPS）誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷的保護及作用機制。方法用1 mg/L LPS誘導(dǎo)人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞（HUVECs） 24 h,Real-time PCR和Western blotting檢測細(xì)胞中miR-423-5p和乙醛脫氫酶2（ALDH2）的表達(dá)。通過轉(zhuǎn)染anti-miR-423-5p和pc DNA-ALDH2下調(diào)miR-423-5p和上調(diào)ALDH2表達(dá),流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡率,Western blotting檢測凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2和Bax的表達(dá),并用ELISA試劑盒檢測LPS誘導(dǎo)后細(xì)胞上清液中白細(xì)胞介素6（IL-6）和腫瘤壞死因子α（TNF-α）的含量;雙熒光素酶報告系統(tǒng)驗證miR-423-5p與ALDH2的調(diào)控關(guān)系。結(jié)果與對照相比,LPS可誘導(dǎo)HUVECs凋亡和損傷,使HUVECs中miR-423-5p、Bax表達(dá)量及IL-6和TNF-α分泌量均顯著升高（P <0. 05）,ALDH2的mRNA和蛋白表達(dá)量及Bcl-2量顯著降低（P <0. 05）;下調(diào)miR-423-5p表達(dá)和過表達(dá)ALDH2均... 

【文章來源】：解剖學(xué)報. 2020,51(06)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：9 頁

【部分圖文】：

LPS處理對HUVECs形態(tài)的影響(熒光染色)

LPS處理對HUVECs中miR-423-5p表達(dá)的影響

ALDH2的3’UTR中含有與miR-423-5p互補的序列，見圖11。雙熒光素酶報告系統(tǒng)結(jié)果如圖12所示，過表達(dá)miR-423-5p可使WT-ALDH2的螢火蟲熒光素酶相對活性顯著降低(P<0.05);而MUT-ALDH2的熒光素酶相對活性無明顯變化。Western blotting實驗結(jié)果顯示，過表達(dá)miR-423-5p可下調(diào)ALDH2表達(dá)量(P<0.05);抑制miR-423-5p表達(dá)則上調(diào)ALDH2表達(dá)量(P<0.05)，見圖13。說明miR-423-5p靶向負(fù)調(diào)控ALDH2的表達(dá)。6．抑制ALDH2表達(dá)逆轉(zhuǎn)了下調(diào)miR-423-5p表達(dá)對LPS誘導(dǎo)的HUVECs損傷的作用


本文編號：3243873