研究背景及目的缺血性下肢血管疾病以其高發(fā)病率和高致殘率已成為威脅人類健康的重大疾病，促進(jìn)血管的新生是目前治療的方向之一。干細(xì)胞治療是近年發(fā)展起來的熱門領(lǐng)域，已用于越來越多的疾病治療中，使用干細(xì)胞治療促進(jìn)血管新生逐漸受到人們的重視。然而，在眾多研究中發(fā)現(xiàn)，干細(xì)胞在移植后由于缺血缺氧、免疫排斥等原因很難長(zhǎng)期生存，直接影響其治療效果。因此，促進(jìn)干細(xì)胞在宿主體內(nèi)的長(zhǎng)期生存成為了直接影響干細(xì)胞治療應(yīng)用的主要瓶頸。Apelin是最早從牛胃的分泌物中提取的一種多肽，后經(jīng)研究是一種脂肪細(xì)胞因子，為血管緊張素受體APJ的內(nèi)源性配體。由于其廣泛存在于人體各個(gè)器官，所以具有多重生物學(xué)效應(yīng)。Apelin可有效增強(qiáng)心肌收縮力，擴(kuò)張血管，降低血壓，同時(shí)對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞、心肌細(xì)胞、干細(xì)胞具有保護(hù)作用。本實(shí)驗(yàn)結(jié)合分子影像學(xué)觀察干細(xì)胞在移植部位的生存與轉(zhuǎn)歸，評(píng)估Apelin對(duì)于脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的生存所起的保護(hù)作用，深入探討Apelin促進(jìn)脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞存活及功能發(fā)揮的保護(hù)機(jī)制，并通過在體分子影像為干細(xì)胞治療在缺血疾病中的長(zhǎng)期療效和不良影響進(jìn)行可靠評(píng)估。方法第一部分：Apelin對(duì)脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞在后肢缺血小鼠體內(nèi)存活和... 

【文章來源】：中國(guó)人民解放軍空軍軍醫(yī)大學(xué)陜西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：103 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
縮略語表
中文摘要
Abstract
前言
文獻(xiàn)回顧
    1 干細(xì)胞對(duì)缺血性疾病治療的研究
        1.1 干細(xì)胞治療概述
        1.2 干細(xì)胞在治療缺血性疾病方面的相關(guān)研究
            1.2.1 骨骼肌成肌細(xì)胞
            1.2.2 全能干細(xì)胞
            1.2.3 外周血祖細(xì)胞
            1.2.4 骨髓干細(xì)胞
            1.2.5 內(nèi)皮祖細(xì)胞
            1.2.6 心臟原位干細(xì)胞
            1.2.7 誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞
            1.2.8 間充質(zhì)干細(xì)胞
        1.3 干細(xì)胞治療中存在的問題
    2 自噬在組織缺血及干細(xì)胞存活增殖中的調(diào)控作用
        2.1 自噬的概念及分類
        2.2 自噬發(fā)生的過程
        2.3 自噬的調(diào)控
        2.4 自噬在缺血/再灌注損傷中的作用
        2.5 自噬在干細(xì)胞治療中的作用
        2.6 小結(jié)
    3 APELIN 促進(jìn)干細(xì)胞存活以及缺血組織的損傷修復(fù)
        3.1 概述
        3.2 Apelin 對(duì)心血管系統(tǒng)的作用
            3.2.1 Apelin 的正性肌力作用
            3.2.2 Apelin 減少心衰引起的心肌重構(gòu)作用
            3.2.3 Apelin 降低血壓作用
            3.2.4 Apelin 的抗缺血再灌注損傷作用
        3.3 Apelin 的細(xì)胞保護(hù)作用
        3.4 Apelin 對(duì)自噬的影響
    4 干細(xì)胞分子影像研究
        4.1 概述
        4.2 分子影像在干細(xì)胞研究中的應(yīng)用
            4.2.1 干細(xì)胞的 MRI 成像（磁性納米顆粒標(biāo)記與示蹤）
            4.2.2 PET 和 SPECT 成像（放射性核素標(biāo)記與示蹤）
            4.2.3 干細(xì)胞的熒光成像
            4.2.4 熒光分子斷層成像(FMT)
            4.2.5 自發(fā)熒光斷層分子影像(BLT)
            4.2.6 生物發(fā)光成像（bioluminescence imaging，BLI）
            4.2.7 干細(xì)胞的多模態(tài)成像
            4.2.8 各種成像示蹤技術(shù)的優(yōu)缺點(diǎn)比較
            4.2.9 對(duì)干細(xì)胞體內(nèi)致瘤性及安全性的分子影像評(píng)價(jià)
            4.2.10 分子影像學(xué)在研究干細(xì)胞移植免疫排斥反應(yīng)方面的應(yīng)用前景
第一部分 Apelin 對(duì)脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞在后肢缺血小鼠體內(nèi)生存和功能的作用
    1 材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器
        1.3 主要實(shí)驗(yàn)試劑
    2 方法
        2.1 脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞分離培養(yǎng)與鑒定
        2.2 建立后肢缺血?jiǎng)游锬Ｐ?br>        2.3 實(shí)驗(yàn)分組
        2.4 ADMSCs 細(xì)胞移植
        2.5 激光多普勒掃描檢測(cè)后肢缺血模型血流
        2.6 生物發(fā)光成像檢測(cè)細(xì)胞存活
        2.7 熒光素酶活性檢測(cè)細(xì)胞活性
        2.8 組織學(xué)觀察細(xì)胞在組織內(nèi)存活
        2.9 免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)新生血管生成
        2.10 自截肢率評(píng)價(jià)缺血程度
        2.11 缺血損傷評(píng)分評(píng)價(jià)缺血損傷改善
        2.12 活動(dòng)損傷評(píng)分評(píng)價(jià)患肢功能改善
        2.13 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 結(jié)果
        3.1 激光多普勒成像檢測(cè)后肢血流恢復(fù)
        3.2 免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)組織內(nèi)新生血管生成
        3.3 自截肢率統(tǒng)計(jì)檢測(cè)患肢功能恢復(fù)
        3.4 活動(dòng)損傷評(píng)分評(píng)估患肢功能恢復(fù)
        3.5 缺血損傷評(píng)分評(píng)估患肢功能恢復(fù)
        3.6 生物發(fā)光成像檢測(cè) ADMSCs 在體內(nèi)生存
        3.7 熒光素酶活性檢測(cè) ADMSCs 在體內(nèi)生存
        3.8 組織學(xué)檢測(cè) ADMSCs 在缺血部位存活
    4 討論
第二部分 Apelin 通過調(diào)節(jié)自噬促進(jìn)缺氧復(fù)氧損傷下脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的生存和功能
    1 材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器
        1.3 主要實(shí)驗(yàn)試劑
    2 方法
        2.1 脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞分離培養(yǎng)與鑒定
        2.2 建立缺氧復(fù)氧模型
        2.3 實(shí)驗(yàn)分組
        2.4. MTT 法檢測(cè)細(xì)胞增殖能力
        2.5 生物發(fā)光成像檢測(cè)細(xì)胞增殖能力
        2.6 TUNEL 法檢測(cè)細(xì)胞凋亡
        2.7 免疫熒光染色檢測(cè)自噬小體生成
        2.8 透射電子顯微鏡檢測(cè)自噬小體生成
        2.9 建立后肢缺血?jiǎng)游锬Ｐ?br>        2.10 激光多普勒掃描檢測(cè)后肢缺血模型血流
        2.11 生物發(fā)光成像檢測(cè) ADMSCs 生存
        2.12 熒光素酶活性檢測(cè) ADMSCs 生存
        2.13 免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)新生血管生成
        2.14 自截肢率評(píng)價(jià)缺血程度
        2.15 缺血損傷評(píng)分評(píng)價(jià)缺血損傷改善
        2.16 活動(dòng)損傷評(píng)分評(píng)價(jià)患肢功能改善
        2.17 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 結(jié)果
        3.1 MTT 法評(píng)估 Apelin 促進(jìn)缺氧復(fù)氧干預(yù)下 ADMSCs 的增殖
        3.2 生物發(fā)光成像評(píng)估 Apelin 促進(jìn)缺氧復(fù)氧干預(yù)下 ADMSCs 的增殖
        3.3 TUNEL 法檢測(cè) Apelin 對(duì)缺氧復(fù)氧干預(yù)下 ADMSCs 凋亡的影響
        3.4 免疫熒光染色檢測(cè)自噬小體中 LC3Ⅱ表達(dá)
        3.5 透射電子顯微鏡檢測(cè)自噬小體生成
        3.6 生物發(fā)光成像檢測(cè) ADMSCs 在體內(nèi)生存
        3.7 熒光素酶檢測(cè) ADMSCs 在體內(nèi)生存
        3.8 激光多普勒成像檢測(cè)后肢血流改善
        3.9 免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)組織內(nèi)新生血管生成
        3.10 自截肢率統(tǒng)計(jì)檢測(cè)患肢功能恢復(fù)
        3.11 活動(dòng)損傷評(píng)分檢測(cè)患肢功能恢復(fù)
        3.12 缺血損傷評(píng)分檢測(cè)患肢功能恢復(fù)
    4 討論
第三部分 Apelin 通過調(diào)節(jié)自噬 AMPK-mTOR-ULK1 與 Akt-Bcl2-beclin1 通路促進(jìn)脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞生存的分子機(jī)制
    1 材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
        1.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器
        1.3 主要實(shí)驗(yàn)試劑
    2 方法
        2.1 建立缺氧復(fù)氧細(xì)胞模型
        2.2 實(shí)驗(yàn)分組
        2.3 Westernblot 檢測(cè)
        2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 結(jié)果
        3.1 Western blot 法檢測(cè)缺氧與缺氧復(fù)氧損傷階段自噬信號(hào)通路蛋白的表達(dá)
        3.2 Western blot 法檢測(cè) Apelin 對(duì)缺氧與缺氧復(fù)氧損傷階段自噬信號(hào)通路蛋白的表達(dá)的影響
        3.3 Western blot 法檢測(cè)分別阻斷 AMPK 和 Akt 后 Apelin 缺氧與缺氧復(fù)氧損傷階段自噬信號(hào)通路蛋白的表達(dá)
    4 討論
小結(jié)
參考文獻(xiàn)
個(gè)人簡(jiǎn)歷和研究成果
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]野百合堿誘導(dǎo)的肺動(dòng)脈高壓大鼠肺組織apelin及其受體的變化[J]. 王青,王桂芹,龐玲霞,薛峰,陳醒言,陳然,孔曉霞,龔永生,范小芳.  中國(guó)應(yīng)用生理學(xué)雜志. 2013(02)
[2]Apelin and vascular endothelial growth factor are associated with mobilization of endothelial progenitor cells after acute myocardial infarction[J]. Jiaxin Yea,Ping Nia,Lina Kangb,Biao Xua aDepartment of Cardiology,Drum Tower Clinical College Affiliated with Nanjing Medical University,Nanjing,Jiangsu 210008,China;bDepartment of Cardiology,Drum Tower Hospital(L.N.K.),Nanjing,Jiangsu 210008,China..  Journal of Biomedical Research. 2012(06)



本文編號(hào)：3243608