研究背景及目的缺血性下肢血管疾病以其高發(fā)病率和高致殘率已成為威脅人類健康的重大疾病，促進血管的新生是目前治療的方向之一。干細胞治療是近年發(fā)展起來的熱門領域，已用于越來越多的疾病治療中，使用干細胞治療促進血管新生逐漸受到人們的重視。然而，在眾多研究中發(fā)現(xiàn)，干細胞在移植后由于缺血缺氧、免疫排斥等原因很難長期生存，直接影響其治療效果。因此，促進干細胞在宿主體內(nèi)的長期生存成為了直接影響干細胞治療應用的主要瓶頸。Apelin是最早從牛胃的分泌物中提取的一種多肽，后經(jīng)研究是一種脂肪細胞因子，為血管緊張素受體APJ的內(nèi)源性配體。由于其廣泛存在于人體各個器官，所以具有多重生物學效應。Apelin可有效增強心肌收縮力，擴張血管，降低血壓，同時對血管內(nèi)皮細胞、心肌細胞、干細胞具有保護作用。本實驗結合分子影像學觀察干細胞在移植部位的生存與轉歸，評估Apelin對于脂肪間充質(zhì)干細胞的生存所起的保護作用，深入探討Apelin促進脂肪間充質(zhì)干細胞存活及功能發(fā)揮的保護機制，并通過在體分子影像為干細胞治療在缺血疾病中的長期療效和不良影響進行可靠評估。方法第一部分：Apelin對脂肪間充質(zhì)干細胞在后肢缺血小鼠體內(nèi)存活和... 

【文章來源】：中國人民解放軍空軍軍醫(yī)大學陜西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：103 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
縮略語表
中文摘要
Abstract
前言
文獻回顧
    1 干細胞對缺血性疾病治療的研究
        1.1 干細胞治療概述
        1.2 干細胞在治療缺血性疾病方面的相關研究
            1.2.1 骨骼肌成肌細胞
            1.2.2 全能干細胞
            1.2.3 外周血祖細胞
            1.2.4 骨髓干細胞
            1.2.5 內(nèi)皮祖細胞
            1.2.6 心臟原位干細胞
            1.2.7 誘導性多能干細胞
            1.2.8 間充質(zhì)干細胞
        1.3 干細胞治療中存在的問題
    2 自噬在組織缺血及干細胞存活增殖中的調(diào)控作用
        2.1 自噬的概念及分類
        2.2 自噬發(fā)生的過程
        2.3 自噬的調(diào)控
        2.4 自噬在缺血/再灌注損傷中的作用
        2.5 自噬在干細胞治療中的作用
        2.6 小結
    3 APELIN 促進干細胞存活以及缺血組織的損傷修復
        3.1 概述
        3.2 Apelin 對心血管系統(tǒng)的作用
            3.2.1 Apelin 的正性肌力作用
            3.2.2 Apelin 減少心衰引起的心肌重構作用
            3.2.3 Apelin 降低血壓作用
            3.2.4 Apelin 的抗缺血再灌注損傷作用
        3.3 Apelin 的細胞保護作用
        3.4 Apelin 對自噬的影響
    4 干細胞分子影像研究
        4.1 概述
        4.2 分子影像在干細胞研究中的應用
            4.2.1 干細胞的 MRI 成像（磁性納米顆粒標記與示蹤）
            4.2.2 PET 和 SPECT 成像（放射性核素標記與示蹤）
            4.2.3 干細胞的熒光成像
            4.2.4 熒光分子斷層成像(FMT)
            4.2.5 自發(fā)熒光斷層分子影像(BLT)
            4.2.6 生物發(fā)光成像（bioluminescence imaging，BLI）
            4.2.7 干細胞的多模態(tài)成像
            4.2.8 各種成像示蹤技術的優(yōu)缺點比較
            4.2.9 對干細胞體內(nèi)致瘤性及安全性的分子影像評價
            4.2.10 分子影像學在研究干細胞移植免疫排斥反應方面的應用前景
第一部分 Apelin 對脂肪間充質(zhì)干細胞在后肢缺血小鼠體內(nèi)生存和功能的作用
    1 材料
        1.1 實驗動物
        1.2 主要實驗儀器
        1.3 主要實驗試劑
    2 方法
        2.1 脂肪間充質(zhì)干細胞分離培養(yǎng)與鑒定
        2.2 建立后肢缺血動物模型
        2.3 實驗分組
        2.4 ADMSCs 細胞移植
        2.5 激光多普勒掃描檢測后肢缺血模型血流
        2.6 生物發(fā)光成像檢測細胞存活
        2.7 熒光素酶活性檢測細胞活性
        2.8 組織學觀察細胞在組織內(nèi)存活
        2.9 免疫組織化學染色檢測新生血管生成
        2.10 自截肢率評價缺血程度
        2.11 缺血損傷評分評價缺血損傷改善
        2.12 活動損傷評分評價患肢功能改善
        2.13 統(tǒng)計學分析
    3 結果
        3.1 激光多普勒成像檢測后肢血流恢復
        3.2 免疫組織化學染色檢測組織內(nèi)新生血管生成
        3.3 自截肢率統(tǒng)計檢測患肢功能恢復
        3.4 活動損傷評分評估患肢功能恢復
        3.5 缺血損傷評分評估患肢功能恢復
        3.6 生物發(fā)光成像檢測 ADMSCs 在體內(nèi)生存
        3.7 熒光素酶活性檢測 ADMSCs 在體內(nèi)生存
        3.8 組織學檢測 ADMSCs 在缺血部位存活
    4 討論
第二部分 Apelin 通過調(diào)節(jié)自噬促進缺氧復氧損傷下脂肪間充質(zhì)干細胞的生存和功能
    1 材料
        1.1 實驗動物
        1.2 主要實驗儀器
        1.3 主要實驗試劑
    2 方法
        2.1 脂肪間充質(zhì)干細胞分離培養(yǎng)與鑒定
        2.2 建立缺氧復氧模型
        2.3 實驗分組
        2.4. MTT 法檢測細胞增殖能力
        2.5 生物發(fā)光成像檢測細胞增殖能力
        2.6 TUNEL 法檢測細胞凋亡
        2.7 免疫熒光染色檢測自噬小體生成
        2.8 透射電子顯微鏡檢測自噬小體生成
        2.9 建立后肢缺血動物模型
        2.10 激光多普勒掃描檢測后肢缺血模型血流
        2.11 生物發(fā)光成像檢測 ADMSCs 生存
        2.12 熒光素酶活性檢測 ADMSCs 生存
        2.13 免疫組織化學染色檢測新生血管生成
        2.14 自截肢率評價缺血程度
        2.15 缺血損傷評分評價缺血損傷改善
        2.16 活動損傷評分評價患肢功能改善
        2.17 統(tǒng)計學分析
    3 結果
        3.1 MTT 法評估 Apelin 促進缺氧復氧干預下 ADMSCs 的增殖
        3.2 生物發(fā)光成像評估 Apelin 促進缺氧復氧干預下 ADMSCs 的增殖
        3.3 TUNEL 法檢測 Apelin 對缺氧復氧干預下 ADMSCs 凋亡的影響
        3.4 免疫熒光染色檢測自噬小體中 LC3Ⅱ表達
        3.5 透射電子顯微鏡檢測自噬小體生成
        3.6 生物發(fā)光成像檢測 ADMSCs 在體內(nèi)生存
        3.7 熒光素酶檢測 ADMSCs 在體內(nèi)生存
        3.8 激光多普勒成像檢測后肢血流改善
        3.9 免疫組織化學染色檢測組織內(nèi)新生血管生成
        3.10 自截肢率統(tǒng)計檢測患肢功能恢復
        3.11 活動損傷評分檢測患肢功能恢復
        3.12 缺血損傷評分檢測患肢功能恢復
    4 討論
第三部分 Apelin 通過調(diào)節(jié)自噬 AMPK-mTOR-ULK1 與 Akt-Bcl2-beclin1 通路促進脂肪間充質(zhì)干細胞生存的分子機制
    1 材料
        1.1 實驗細胞
        1.2 主要實驗儀器
        1.3 主要實驗試劑
    2 方法
        2.1 建立缺氧復氧細胞模型
        2.2 實驗分組
        2.3 Westernblot 檢測
        2.4 統(tǒng)計學分析
    3 結果
        3.1 Western blot 法檢測缺氧與缺氧復氧損傷階段自噬信號通路蛋白的表達
        3.2 Western blot 法檢測 Apelin 對缺氧與缺氧復氧損傷階段自噬信號通路蛋白的表達的影響
        3.3 Western blot 法檢測分別阻斷 AMPK 和 Akt 后 Apelin 缺氧與缺氧復氧損傷階段自噬信號通路蛋白的表達
    4 討論
小結
參考文獻
個人簡歷和研究成果
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]野百合堿誘導的肺動脈高壓大鼠肺組織apelin及其受體的變化[J]. 王青,王桂芹,龐玲霞,薛峰,陳醒言,陳然,孔曉霞,龔永生,范小芳.  中國應用生理學雜志. 2013(02)
[2]Apelin and vascular endothelial growth factor are associated with mobilization of endothelial progenitor cells after acute myocardial infarction[J]. Jiaxin Yea,Ping Nia,Lina Kangb,Biao Xua aDepartment of Cardiology,Drum Tower Clinical College Affiliated with Nanjing Medical University,Nanjing,Jiangsu 210008,China;bDepartment of Cardiology,Drum Tower Hospital(L.N.K.),Nanjing,Jiangsu 210008,China..  Journal of Biomedical Research. 2012(06)



本文編號：3243608