目的：分析總結(jié)鐵劑難治性缺鐵性貧血（IRIDA）患者臨床特征及其跨膜絲氨酸蛋白酶6（TMPRSS6）基因突變情況,提高對(duì)鐵劑難治性缺鐵性貧血（IRIDA）的認(rèn)識(shí)。方法：采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測(cè)臨床表現(xiàn)疑似IRIDA的患者外周血hepcidin水平,符合IRIDA診斷者納入本次研究。總結(jié)其血液學(xué)特征；PCR擴(kuò)增及測(cè)序方法檢測(cè)分析其家系TMPRSS6基因突變情況；通過Swiss-Model及Alamut軟件預(yù)測(cè)分析相應(yīng)突變對(duì)TMPRSS6基因轉(zhuǎn)錄、翻譯及蛋白空間結(jié)構(gòu)的影響；實(shí)時(shí)熒光定量PCR（RQ-PCR）檢鋇TMPRSS6基因mRNA表達(dá)水平。結(jié)果：本次研究共納入4個(gè)IRIDA家系中5例IRIDA患者。臨床表現(xiàn)為輕中度小細(xì)胞低色素貧血,MCV、MCH極低、血清鐵及轉(zhuǎn)鐵蛋白飽和度明顯減低,血漿hepcidin明顯高于獲得性IDA患者,對(duì)補(bǔ)鐵治療尤其是口服補(bǔ)鐵治療缺乏網(wǎng)織紅細(xì)胞和血紅蛋白升高反應(yīng)。TMPRSS6基因（參考序列NM153609.2）檢測(cè)發(fā)現(xiàn)1例患者7號(hào)外顯子c.757A>G（K253E）純合子錯(cuò)義突變；計(jì)算機(jī)模擬分析預(yù)測(cè)該突變可導(dǎo)致TMPRSS6蛋白空間構(gòu)象改... 

【文章來源】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：98 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

TMPRSS6結(jié)構(gòu)示意圖

圖2.TMPRSS6溶解曲線. PCR擴(kuò)增TMPRSS6編碼區(qū)c.lll3G>A兩端cDNA1)引物設(shè)計(jì)針對(duì)c.in3G>A位點(diǎn)上下游設(shè)計(jì)引碼序列為模板，在Primer5軟件中設(shè)計(jì)包含c.l 1的PCR雙向引物，后在NCBI的BLAST數(shù)據(jù)有同源序列（表3)。表 3. TMPRSS6 c.lll3G>A 上下游引物Primer sequences (F = forward, R = reverse)F: ATGGCGGTCGTCTGGAAGAAGGGR: GATCTGGGAGGTGAAGTTGATGGTGA

A.細(xì)胞內(nèi)鐵（+ ) B.?細(xì)胞外鐵（++)圖3.患者A骨髓涂片鐵染色骨髓涂片鐵染色（xlOO倍，普魯士藍(lán)反應(yīng)）：A -細(xì)胞內(nèi)鐵幼紅細(xì)胞內(nèi)鐵顆粒明顯減少，顆粒細(xì)小，鐵粒幼細(xì)胞較少見；B -細(xì)胞外鐵骨髓小粒中可見較多呈藍(lán)色小片狀分布的鐵顆粒，部分呈深藍(lán)色粗顆粒狀或塊分布外周血血衆(zhòng)hepcidin檢測(cè)結(jié)果顯示，健康成人hepcidin水平為157.02(15.18-357.28)ng/ml； 8例經(jīng)補(bǔ)鐵治療有效的IDA患者補(bǔ)鐵治療前外周血hepcidin水平 5.19 (3.31-12.02) ng/ml; A 患者就診時(shí) hepcidin 水平血楽 213. H ng/ml,與獲得性缺鐵性貧血患者相比明顯升高。TMPRSS6基因檢測(cè)顯示患者TMPRSS6基因7號(hào)外顯子存在純合子c.757A>G(K253E)突變，導(dǎo)致TMPRSS6蛋白第253位賴氨酸被谷氨酸替代，發(fā)生K253E錯(cuò)義突變（圖4)，其父母均為該位點(diǎn)雜合子突變。通過Swiss-Model分析發(fā)現(xiàn)TMPRSS6蛋白第253位氨基酸由賴氨酸突變?yōu)楣劝彼岷�，三維結(jié)構(gòu)模型顯示，突變后TMPRSS6蛋白絲氨酸蛋白酶活性區(qū)、SEA、


本文編號(hào)：3242105