研究背景急性心肌梗死（Acute myocardial infarction,AMI）,是一種以急性冠狀動脈持續(xù)性缺血導(dǎo)致心肌細(xì)胞壞死為病理基礎(chǔ),發(fā)病迅速,病死率高,預(yù)后差,嚴(yán)重危及生命的臨床急癥。心梗三項標(biāo)記物（心肌肌鈣蛋白I、肌酸激酶同工酶MB和肌紅蛋白）作為早期血清學(xué)指標(biāo),對于AMI的診斷有重大意義。傳統(tǒng)的生物標(biāo)記物檢測方法,如酶聯(lián)免疫吸附或電化學(xué)發(fā)光等檢測方法雖然具有很高的靈敏度,但需配備大型的精密檢測設(shè)備和較長的檢測時間,且設(shè)備操作方法繁瑣。而基于床旁檢測技術(shù)的免疫層析檢測（ICT,immunochromatographytest）方法由于便攜、快速、精確、操作簡單等優(yōu)點(diǎn)在基層以及急診中廣泛應(yīng)用。該方法中商業(yè)化最為成熟的是熒光免疫層析檢測,但由于熒光信號存在背景高、光干擾、熒光猝滅等缺點(diǎn)一直限制其進(jìn)一步應(yīng)用。近段時間,基于磁性納米珠（MNBs,magnetic nanobeads）的ICT技術(shù)因具有高信噪比、大抗體偶聯(lián)總表面積、磁信號穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)被國內(nèi)外學(xué)者看好,擁有廣闊的應(yīng)用前景。方法與目的本研究采用MNBs與捕獲單克隆抗體偶聯(lián)構(gòu)建針對心肌肌鈣蛋白I（cTnl,cardiac... 

【文章來源】：南方醫(yī)科大學(xué)廣東省

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－２偶聯(lián)前后磁珠的水合粒徑圖（Ａ）和Ｚｅｔａ電位圖（Ｂ）??Ｆｉｇｕｒｅ?２－２?（Ａ）?Ｄｙｎａｍｉｃ?ｌｉｇｈｔ?ｓｃａｔｔｅｒｉｎｇ?（ＤＬＳ）?ｒｅｓｕｌｔ?ｏｆ?ｆｒｅｅ?ＭＮＢｓ?ａｎｄ?ｔｈｒｅｅ?ｐｒｏｂｅｓ??（Ｂ）Ｚｅａｏｔｅｎｔｉａｏｆ?ｆｒｅｅ?ＭＮＢｓ?ａｎｄ?ｔｈｒｅｅｒｏｂｅｓ??

?Ｂｃｋｍｂ??難：ｌ?■■■??圖２－２偶聯(lián)前后磁珠的水合粒徑圖（Ａ）和Ｚｅｔａ電位圖（Ｂ）??Ｆｉｇｕｒｅ?２－２?（Ａ）?Ｄｙｎａｍｉｃ?ｌｉｇｈｔ?ｓｃａｔｔｅｒｉｎｇ?（ＤＬＳ）?ｒｅｓｕｌｔ?ｏｆ?ｆｒｅｅ?ＭＮＢｓ?ａｎｄ?ｔｈｒｅｅ?ｐｒｏｂｅｓ??（Ｂ）?Ｚｅｔａ?ｐｏｔｅｎｔｉａｌ?ｏｆ?ｆｒｅｅ?ＭＮＢｓ?ａｎｄ?ｔｈｒｅｅ?ｐｒｏｂｅｓ??對應(yīng)的粒度儀動態(tài)光散射檢測結(jié)果顯示（圖Ａ），裸磁珠的水合動力直徑平??均為１９８?ｎｍ。裸磁珠偶聯(lián)ｃＴｎｌ、ＣＫＭＢ和Ｍｙｏ抗體后，其平均直徑分別增加到??２８５?ｎｍ、２７８?ｎｍ和３３４?ｎｍ，且粒徑的分布情況在偶聯(lián)前后基本保持一致，說明??在偶聯(lián)過程中磁珠粒沒有出現(xiàn)大范圍內(nèi)聚集或溶解的現(xiàn)象。增加的水合粒徑主??要是偶聯(lián)的抗體在水溶液中呈伸展?fàn)顟B(tài)，因此水合粒徑明顯增大。圖Ｂ顯示裸??磁珠的Ｚｅｔａ電位為－３９?ｍＶ，說明裸的磁珠在純水溶液中有中等強(qiáng)度的分散性和??穩(wěn)定性。如圖３所示，偶聯(lián)了不同抗體后的不同探針Ｚｅｔａ電位分別降至－２４．?１?ｍＶ??（ｃＴｎｌ），－１４．?５?ｍＶ?（ＣＫＭＢ），－１０．７?ｍＶ?（Ｍｙｏ），表明抗體成功占領(lǐng)了磁珠表面??的羧基位點(diǎn)。由于表面有抗體的包裹

Ｆｉｇｕｒｅ?２－４?Ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ?ｃｕｒｖｅ?ｏｆ?ＢＣＡ?ｋｉｔ?ｔｅｓｔ?ａｎｄ?ｔｈｅ?ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ?ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ?ｅｆｆｅｃｔ?ｏｆ??ｐｒｏｂｅｓ??以標(biāo)準(zhǔn)蛋白濃度（ｍｇ／ｍＬ）為橫坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)蛋白吸光值為縱坐標(biāo)繪制ＢＣＡ??白定量檢測標(biāo)準(zhǔn)曲線，右側(cè)縱坐標(biāo)軸表示每毫克磁珠所能偶聯(lián)的抗體量，其??算公式為：??．ｔ．ＷＷＥＢＨＹ本加入抗體量－上清液抗體量ｉｎｎｎ／??抗體偶聯(lián)率＝?，＾?ａ?Ｘ?１?〇〇％??加入抗體量??以上實驗每組做三次，以平均值土標(biāo)準(zhǔn)差的結(jié)果表示。如圖２－４所示，測得??吸光值與標(biāo)準(zhǔn)牛血清蛋白濃度之間存在線性關(guān)系，關(guān)系公式為：Ｙ＝?２．１８８６?Ｘ?＋??．００００１７，?Ｒ２?＝?０．９９８９，擬合度良好。對應(yīng)的ｃＴｎＬ?ＣＫＭＢ、Ｍｙｏ探針的抗體偶??量為：４１．５３?±６．０８嗎，２４．１０?±４．７３叩，４７．９０?±４．２４?｜ｉｇ；對應(yīng)的偶聯(lián)率分別??：６９．２２?±８．４６％，４８．２１?±９．４７％，４７．９０?±４．２４％。三種抗體的偶聯(lián)率偏差均??于１０％，說明本研究提出的偶聯(lián)方案有較好的偶聯(lián)穩(wěn)定性及重復(fù)性，有利于??業(yè)生。ＣＫＭＢＭｏ５０，ｃＴｎｌ，??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3237565