本文關(guān)鍵詞：白藜蘆醇抑制缺氧復(fù)氧誘導(dǎo)心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的作用及機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：實(shí)驗(yàn)背景及目的： 近幾年來，隨著心血系統(tǒng)疾病治療策略的進(jìn)步以及溶栓術(shù)、血管成形術(shù)、冠脈搭橋術(shù)和器官移植等方法在臨床的應(yīng)用，使缺血的心臟組織重新得到血流灌注后，可使心臟結(jié)構(gòu)、功能得到恢復(fù)和改善；但有時(shí)心臟缺血后再灌注不僅使心臟功能不能恢復(fù)，而且造成心肌組織結(jié)構(gòu)和功能障礙進(jìn)一步加重，甚至發(fā)生不可逆性損傷的現(xiàn)象稱為心肌缺血/再灌注損傷(Myocardium ischemia/reperfusion injury，MI/RI)。心肌缺血/再灌注損傷可引起心肌細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)改變、基質(zhì)中致密物增多，大量的鈣沉積、線粒體水腫、膜通透性改變和細(xì)胞器斷裂溶解等超微結(jié)構(gòu)的改變，這些是缺血心肌可逆性損傷向不可逆損傷的病理生理轉(zhuǎn)變過程。再灌后不但使心肌細(xì)胞發(fā)生上述的病理變化，同時(shí)導(dǎo)致心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞（Cardiac microvascular endothelial cell,CMEC）在形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能發(fā)生異常的病理生理性改變，血管內(nèi)皮舒張因子（EDRF）減少和內(nèi)皮素（ET-1）增多，微血管內(nèi)皮的水腫和破壞，致使血小板與白細(xì)胞黏附、聚集、栓塞，造成心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡(Apoptosis)或壞死。文獻(xiàn)報(bào)道，心肌缺血/再灌注損傷時(shí)，心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞功能和結(jié)構(gòu)形態(tài)異常改變發(fā)生的時(shí)間早于心肌細(xì)胞[1]，心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞受損引起活性氧物質(zhì)的生成，釋放細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子、炎性組織因子、發(fā)生脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，從而加重內(nèi)皮細(xì)胞損傷、心肌組織結(jié)構(gòu)和功能障礙。 白藜蘆醇（Resveratrol）是廣泛存在于葡萄、藜蘆、虎杖等植物中的一種多酚類化合物，具有抗炎、抗氧化、抑制血小板黏附、聚集，調(diào)節(jié)能量代謝等生物學(xué)保護(hù)作用[2]。研究發(fā)現(xiàn)，白藜蘆醇可抑制缺血缺氧誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡、增強(qiáng)心肌組織抵抗損傷的能力，維持氧供需平衡，促進(jìn)缺血心肌細(xì)胞的活力，改善心功能。近期研究證實(shí)，磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）信號(hào)通路可參與缺氧復(fù)氧誘導(dǎo)心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞病理生理性損傷的發(fā)生、發(fā)展過程，并調(diào)節(jié)細(xì)胞存活、增殖分化、細(xì)胞遷移和能量代謝等生物學(xué)作用[3]；缺氧誘導(dǎo)因子-1α(Hypoxia induciblefactor-1α, HIF-1α)是缺氧環(huán)境下，廣泛存在于人體組織和哺乳動(dòng)物體內(nèi)的一種生存轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，通過調(diào)控一系列與適應(yīng)缺氧有關(guān)的基因的表達(dá)，促進(jìn)氧轉(zhuǎn)運(yùn)、血管新生、抑制細(xì)胞凋亡、生存應(yīng)激和能量代謝等在保持機(jī)體內(nèi)氧穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮著重要的生理學(xué)作用。 我們前期研究發(fā)現(xiàn)，白藜蘆醇可抑制缺氧復(fù)氧誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡[4]，但是缺氧復(fù)氧前給予白藜蘆醇干預(yù)是否對(duì)心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞具有保護(hù)作用及其作用機(jī)制否是與激活PI3K/Akt/HIF-1α信號(hào)通路有關(guān)尚未見文獻(xiàn)報(bào)道。 研究目的： 1.觀察不同濃度的白藜蘆醇對(duì)缺氧復(fù)氧誘導(dǎo)心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞活性和細(xì)胞凋亡的影響。 2.探討白藜蘆醇抑制缺氧復(fù)氧誘導(dǎo)心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡是否通過激活PI3K/Akt/HIF-1α信號(hào)通路而實(shí)現(xiàn)的。 實(shí)驗(yàn)方法：第一部分：白藜蘆醇預(yù)處理對(duì)缺氧復(fù)氧誘導(dǎo)心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞的影響 1．取SD雄性大鼠心臟的左心室心肌，利用酶消化法成功分離心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞（CMEC），Dil-Ac-LDL與DAPI免疫熒光雙染法鑒定細(xì)胞。 2．建立心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞缺氧復(fù)氧模型，設(shè)立對(duì)照組、缺氧復(fù)氧組、不同濃度白藜蘆醇組（5、10、20、30、40μmol/L）。MTT比色法檢測(cè)心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞的活性，TUNE染色法檢測(cè)心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，并確定白藜蘆醇最適實(shí)驗(yàn)濃度。 第二部分：PI3K/Akt/HIF-1α信號(hào)通路在白藜蘆醇抑制缺氧復(fù)氧誘導(dǎo)心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡中的作用 體外培養(yǎng)2-3代的心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞（CMEC），建立缺氧復(fù)氧細(xì)胞損傷模型，并隨機(jī)分為1）對(duì)照組2）缺氧復(fù)氧(H/R)組3）缺氧復(fù)氧(H/R)+20μmol/L白藜蘆醇組4）缺氧復(fù)氧(H/R)+20μmol/L白藜蘆醇+LY294002組。MTT比色法檢測(cè)心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞的活性；Transwell檢測(cè)心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞的遷移能力；分別以PI-AnnexinV、TUNEL染色法檢測(cè)心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡；Western-blot法檢測(cè)心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞的P-Akt、HIF-1α蛋白表達(dá)水平。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果： 1.心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞鑒定：細(xì)胞質(zhì)Dil-Ac-LDL染色陽性（呈紅色熒光），細(xì)胞核DAPI染色陽性（呈藍(lán)色熒光），證實(shí)體外所培養(yǎng)的細(xì)胞為心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞（CMEC）。 2. MTT、TUNEL法檢測(cè)結(jié)果表明：不同濃度（5、10、20、30、40μmol/L）白藜蘆醇均可提高細(xì)胞活性，抑制細(xì)胞凋亡，中濃度的白藜蘆醇（20μmol/L）保護(hù)作用明顯(P0.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；故選定20μmol/L白藜蘆醇作為最適實(shí)驗(yàn)濃度。 3.與對(duì)照組相比，缺氧復(fù)氧組P-Akt、HIF-1α蛋白表達(dá)水平升高(P0.05)；與缺氧復(fù)氧組相比，白藜蘆醇組P-Akt、HIF-1α蛋白表達(dá)水平明顯升高(P0.05)；與白藜蘆醇組相比，缺氧復(fù)氧(H/R)+20μmol/L白藜蘆醇+LY294002組CMEC的活性、遷移能力均明顯降低(P0.05)，細(xì)胞凋亡明顯增加(P0.05)，P-Akt、HIF-1α蛋白表達(dá)水平明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)果表明白藜蘆醇抑制缺氧復(fù)氧誘導(dǎo)心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡可能與Ak磷酸化和上調(diào)HIF-1α蛋白表達(dá)水平有關(guān)。 結(jié)論： 1.不同濃度的白藜蘆醇可增強(qiáng)缺氧復(fù)氧誘導(dǎo)心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞的活性、抑制細(xì)胞凋亡，而且在一定濃度范圍內(nèi)具有劑量依賴性。 2.白藜蘆醇可抑制心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，并增強(qiáng)細(xì)胞的活性和遷移能力，，其生物學(xué)保護(hù)作用可能是通過激活PI3K/Akt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路并上調(diào)細(xì)胞HIF-1α蛋白表達(dá)水平而實(shí)現(xiàn)。
【關(guān)鍵詞】：白藜蘆醇 心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞 缺氧復(fù)氧 凋亡 PI3K/Akt HIF-1α
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R541.4
【目錄】：

• 縮略語表4-5
• 中文摘要5-9
• Abstract9-13
• 前言13-15
• 文獻(xiàn)回顧15-26
• 實(shí)驗(yàn)一 白藜蘆醇預(yù)處理對(duì)缺氧復(fù)氧誘導(dǎo)心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞的影響26-34
• 1 材料26-27
• 2 方法27-29
• 3 結(jié)果29-32
• 4 討論32-34
• 實(shí)驗(yàn)二 PI3K/Akt/HIF-1α 信號(hào)通路在白藜蘆醇抑制缺氧復(fù)氧誘導(dǎo)心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡中的作用34-45
• 1 材料34-36
• 2 方法36-37
• 3 結(jié)果37-42
• 4 討論42-45
• 小結(jié)45-46
• 參考文獻(xiàn)46-56
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷和研究成果56-57
• 致謝57

【引證文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 王尉;周曉晶;樂勝鋒;杜寧;林楠;張經(jīng)華;;白藜蘆醇標(biāo)準(zhǔn)樣品的研制[J];中國(guó)測(cè)試;2015年04期

2 劉e

本文編號(hào)：320668