[目的]本研究通過使用新一代測序技術(shù)來獲得急性心肌梗死血清外泌體的miRNAs差異表達(dá)譜,從中篩選出差異顯著的miRNA;研究差異表達(dá)的miRNA在急性心肌梗死診斷中的作用;找出與其相關(guān)的靶基因,闡明其在急性心肌梗死中的作用。[方法]本研究收集急性心肌梗死患者20例和健康成年人20例外周血標(biāo)本,提取外泌體RNA,Western blot檢測外泌體標(biāo)記CD63和CD81表達(dá)變化,運(yùn)用新一代測序技術(shù)結(jié)合生物信息學(xué)分析獲得急性心肌梗死患者血清外泌體的miRNA差異表達(dá)譜;使用RT-PCR對初篩差異外泌體miRNA進(jìn)行驗(yàn)證;對二次篩選出的miRNA進(jìn)行靶基因預(yù)測,信號通路分析,GO注釋,揭示其作用于急性心肌梗死的可能機(jī)制。[結(jié)果]1.急性心肌梗死患者的體重指數(shù)高于對照組,急性心肌梗死患者的肌鈣蛋白T（c Tn T）、肌紅蛋白、肌酸激酶（CK）和肌酸激酶同工酶（CK-MB）在急性心肌梗死中的表達(dá)水平均高于正常體檢者（P<0.05）。2.AMI患者和對照組的血清外泌體中,均可以檢測到CD63,CD81表達(dá),但檢測不到內(nèi)參β-actin的表達(dá)。AMI患者和白細(xì)對照組胞中CD63,CD81表達(dá)很... 

【文章來源】：南華大學(xué)湖南省

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
主要英文縮略詞索引
第1章 前言
    1.1 急性心肌梗死(AMI)研究現(xiàn)狀
    1.2 外泌體與心血管疾病的進(jìn)展
    1.3 miRNA與心血管疾病
    1.4 新一代測序技術(shù)的應(yīng)用
    1.5 研究內(nèi)容和研究意義
第2章 材料與方法
    2.1 試劑與儀器
        2.1.1 主要試劑
        2.1.2 主要儀器和設(shè)備
    2.2 實(shí)驗(yàn)對象及臨床資料
        2.2.1 急性心肌梗死研究對象納入標(biāo)準(zhǔn)及來源
        2.2.2 研究對象知情同意書
    2.3 血液樣本的采集與保存
        2.3.1 用于高通量二代測序檢測血液樣本的采集
        2.3.2 其他血液樣本的采集
    2.4 外泌體RNA提取
        2.4.1 外泌體提取
        2.4.2 總RNA提取
        2.4.3 總RNA鑒定
    2.5 miRNA表達(dá)譜測序分析
    2.6 qRT-PCR檢測
    2.7 Western blot
    2.8 所涉及到的相關(guān)數(shù)據(jù)庫及生物信息學(xué)軟件分析
    2.9 統(tǒng)計(jì)分析
第3章 結(jié)果
    3.1 急性心肌梗死(AMI)和正常人一般情況比較
    3.2 外泌體標(biāo)記蛋白檢測
    3.3 總RNA濃度測定
    3.4 AMI與健康人差異表達(dá)mi RNAs譜
    3.5 qRT-PCR驗(yàn)證二代測序結(jié)果
    3.6 miRNA所調(diào)控的靶基因信號通路分析
第4章 討論
    4.1 AMI研究現(xiàn)狀與存在問題
    4.2 AMI血清診斷標(biāo)記物研究進(jìn)展
    4.3 miRNA可作為AMI早期診斷的潛在標(biāo)志物
    4.4 外泌體與AMI
    4.5 miR-1、miR-133a、miR-208a與AMI
    4.6 本研究不足之處
第5章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
文獻(xiàn)綜述
    參考文獻(xiàn)
附圖
攻讀學(xué)位期間的科研成果
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Stem cell-derived exosomes-an emerging tool for myocardial regeneration[J]. Erzsebet Lazar,Theodora Benedek,Szilamer Korodi,Nora Rat,Jocelyn Lo,Imre Benedek.  World Journal of Stem Cells. 2018(08)



本文編號：3194282