目的：1.觀察高糖對H9c2心肌細胞增殖、凋亡及纖維化的影響。2.觀察以Notch-1為靶點干預(yù)對高糖誘導(dǎo)的H9c2心肌細胞增殖、凋亡及纖維化的影響。3.探討過表達Notch-1抑制高糖誘導(dǎo)的H9c2心肌細胞凋亡及纖維化的機制。方法：1.體外低糖正常培養(yǎng)H9c2細胞，再分別運用高糖、γ分泌肽酶抑制劑（DAPT）和Notch-1過表達慢病毒進行干預(yù)。2.實驗分六組：①Control組：正常對照組，用5.5mmol/L低糖培養(yǎng)基培養(yǎng)H9c2細胞；②Mannitol組：甘露醇高滲對照組，用含33mmol/L甘露醇的培養(yǎng)基培養(yǎng)H9c2細胞；③High glucose組：陽性對照組，用含33mmol/L葡萄糖的培養(yǎng)基培養(yǎng)H9c2細胞；④DAPT組：用Notch-1特異性阻斷劑γ分泌肽酶抑制劑（DAPT）干預(yù)H9c2細胞；⑤Notch-1組：感染Notch-1過表達病毒組；⑥GFP組：感染空載體慢病毒組。3.DAPT干預(yù)48h，慢病毒感染72h后，用CCK-8試劑盒檢測各組H9c2細胞的增殖抑制率；應(yīng)用Annexin V-FITC/PI雙染色后流式細胞儀測各組H9c2細胞凋亡率并比較；同時應(yīng)用qR... 

【文章來源】：南昌大學(xué)江西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：52 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
中英文縮略詞表
第1章 引言
    1.1 Notch 信號通路簡單概述以及在心臟中的作用
    1.2 PI3K/AKT 信號通路與心肌保護作用
    1.3 Notch-1 信號系統(tǒng)與 PI3K/AKT 通路相互整合參與心肌保護
    1.4 Notch-1 信號系統(tǒng)在心肌細胞纖維化中的作用
    1.5 以 PI3K/AKT 為切入點研究 Notch-1 信號系統(tǒng)對心肌損傷的保護作用及機制
第2章 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 細胞
        2.1.2 主要試劑及耗材
        2.1.3 主要儀器
    2.2 實驗方法
        2.2.1 器材的滅菌、去 RNA 酶處理
        2.2.2 相關(guān)液體的配制
        2.2.3 大鼠胚胎心肌細胞株 H9c2 細胞的體外培養(yǎng)
        2.2.4 γ分泌肽酶抑制劑(DAPT)使用濃度的測定
        2.2.5 Notch-1 慢病毒感染 H9c2 細胞確定 MOI 值
        2.2.6 正式慢病毒感染實驗
        2.2.7 CCK-8 檢測各組 H9c2 細胞增殖的變化
        2.2.8 應(yīng)用 Annexin V /PI 雙染色后流式細胞儀測各組心肌細胞凋亡率并比較
        2.2.9 qRT-PCR 檢測 DAPT 干預(yù)和 Notch-1 過表達慢病毒感染后各組H9c2 細胞 PI3K/AKT mRNA 的表達
        2.2.10 Western blot 檢測 DAPT 干預(yù)和 Notch-1 過表達慢病毒感染后各組H9c2 細胞 Notch-1、P-PI3K/P-AKT、Bax、Bcl-2、α-sma、collagen I 蛋白的表達
    2.3 統(tǒng)計學(xué)分析
第3章 結(jié)果
    3.1 H9c2 細胞的生長特點
    3.2 不同濃度 DAPT 對 H9c2 心肌細胞增殖的影響
    3.3 空載體慢病毒感染 H9c2 細胞測 MOI 值結(jié)果
    3.4 Western blot 法測定各組細胞 Notch-1 蛋白的表達
    3.5 Notch-1對心肌細胞增殖的影響:CCK-8試劑盒檢測各組H9c2細胞的增殖抑制率
    3.6 Notch-1 對心肌細胞凋亡的影響：
        3.6.1 Western blot 法測定各組細胞 Bax、Bcl-2 的表達
        3.6.2 應(yīng)用 Annexin V-FITC/PI 雙染色后流式細胞儀測各組 H9c2 心肌細胞凋亡率
    3.7 Notch-1 對心肌細胞纖維化反應(yīng)的影響：Western blot 法測定各組H9c2 細胞中α-sma、collagen I 蛋白表達
    3.8 定量 RT-PCR 法測定各組細胞中 PI3K/AKT mRNA 含量并比較
    3.9 Western blot 法測定各組細胞 p-PI3K/p-AKT 蛋白的表達
第4章 討論
第5章 結(jié)論與展望
    5.1 結(jié)論
    5.2 展望
致謝
參考文獻
綜述
    參考文獻



本文編號：3180586