目的:探討白介素（Interleukin,IL）-35對(duì)脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）誘導(dǎo)的內(nèi)皮功能障礙（Endothelial dysfunction,ED）中的作用及其機(jī)制。方法:細(xì)胞部分:1、將狀態(tài)良好的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）,傳代后培養(yǎng)24h,分為5組,分別為空白對(duì)照組、LPS組、LPS+IL-35（1ng/ml）組、LPS+IL-35（10ng/ml）組、LPS+IL-35（100ng/ml）組,加用LPS處理24h后,再予三種不同濃度的人重組蛋白IL-35處理12h,DMEM培養(yǎng)基作為對(duì)照。2、流式細(xì)胞學(xué)分析細(xì)胞凋亡水平收集經(jīng)過(guò)不同處理后的HUVECs,將細(xì)胞密度調(diào)節(jié)至105-106個(gè)細(xì)胞/ml,離心棄上清液,加入5ul的7-AAD處理15min,上機(jī)前5min再加入5ul的PI,最后,使用流式細(xì)胞學(xué)技術(shù)檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡水平。3、人炎癥因子蛋白芯片分析各組細(xì)胞中炎癥因子水平的變化。4、RT-q PCR檢測(cè)細(xì)胞間黏附分子（Intercellular cell adh... 

【文章來(lái)源】：南昌大學(xué)江西省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：63 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第1章 引言
第2章 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞株
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.3 飼料
        2.1.4 主要試劑
        2.1.5 主要儀器設(shè)備
        2.1.6 試劑配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 HUVECs的培養(yǎng)與傳代
        2.2.2 構(gòu)建LPS致內(nèi)皮功能障礙模型
        2.2.3 IL-35 處理HUVECs
        2.2.4 小鼠動(dòng)物實(shí)驗(yàn)
        2.2.5 標(biāo)本采集與處理
    2.3 檢測(cè)指標(biāo)
        2.3.1 流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡
        2.3.2 蛋白芯片
        2.3.3 RT-PCR
        2.3.4 Western Blot
        2.3.5 Elisa操作流程
        2.3.6 免疫組化染色
    2.4 數(shù)據(jù)處理
第3章 結(jié)果
    3.1 不同濃度IL-35對(duì)HUVECs的影響
    3.2 人炎癥因子蛋白芯片分析HUVECs中炎癥因子的表達(dá)
    3.3 IL-35在LPS誘導(dǎo)的內(nèi)皮功能障礙中的保護(hù)作用
        3.3.1 RT-qPCR檢測(cè)VCAM-1、ICAM-1、IL-6和IL-8mRNA的水平
        3.3.2 WB檢測(cè)VCAM-1、ICAM-1、IL-6和IL-8 蛋白表達(dá)水平
    3.4 過(guò)表達(dá)IL-35 改善內(nèi)皮功能障礙
        3.4.1 小鼠體內(nèi)IL-35 的表達(dá)情況
        3.4.2 IL-35 減輕炎癥反應(yīng)
        3.4.3 過(guò)表達(dá)IL-35 降低血管內(nèi)皮黏附分子
    3.5 IL-35 改善內(nèi)皮功能障礙的機(jī)制
        3.5.1 IL-35 促進(jìn)STAT1和STAT4 的磷酸化
        3.5.2 IL-35 促進(jìn)STAT1和STAT4 之間的相互作用
        3.5.3 Fludarabine抑制可逆轉(zhuǎn)IL-35 對(duì)內(nèi)皮功能障礙的保護(hù)作用
        3.5.4 siRNA的轉(zhuǎn)染效率及其干擾效果
        3.5.5 干擾STAT4 的表達(dá)可逆轉(zhuǎn)IL-35 對(duì)內(nèi)皮功能障礙的保護(hù)作用
第4章 討論
    4.1 白介素-35
    4.2 IL-35 在內(nèi)皮功能障礙中的作用
    4.3 在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中內(nèi)皮黏附分子以及炎癥指標(biāo)的變化
    4.4 IL-35 通過(guò)活化STAT1和STAT4 信號(hào)傳導(dǎo)改善內(nèi)皮功能障礙
    4.5 IL-35 的應(yīng)用前景
第5章 結(jié)論與展望
    5.1 結(jié)論
    5.2 本研究的不足及進(jìn)一步設(shè)想
        5.2.1 研究中的不足
        5.2.2 進(jìn)一步設(shè)想
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間的研究成果
綜述
    參考文獻(xiàn)



本文編號(hào)：3150829