目的:探討白介素（Interleukin,IL）-35對脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）誘導(dǎo)的內(nèi)皮功能障礙（Endothelial dysfunction,ED）中的作用及其機制。方法:細(xì)胞部分:1、將狀態(tài)良好的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）,傳代后培養(yǎng)24h,分為5組,分別為空白對照組、LPS組、LPS+IL-35（1ng/ml）組、LPS+IL-35（10ng/ml）組、LPS+IL-35（100ng/ml）組,加用LPS處理24h后,再予三種不同濃度的人重組蛋白IL-35處理12h,DMEM培養(yǎng)基作為對照。2、流式細(xì)胞學(xué)分析細(xì)胞凋亡水平收集經(jīng)過不同處理后的HUVECs,將細(xì)胞密度調(diào)節(jié)至105-106個細(xì)胞/ml,離心棄上清液,加入5ul的7-AAD處理15min,上機前5min再加入5ul的PI,最后,使用流式細(xì)胞學(xué)技術(shù)檢測各組細(xì)胞凋亡水平。3、人炎癥因子蛋白芯片分析各組細(xì)胞中炎癥因子水平的變化。4、RT-q PCR檢測細(xì)胞間黏附分子（Intercellular cell adh... 

【文章來源】：南昌大學(xué)江西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第1章 引言
第2章 材料與方法
    2.1 實驗材料與試劑
        2.1.1 實驗細(xì)胞株
        2.1.2 實驗動物
        2.1.3 飼料
        2.1.4 主要試劑
        2.1.5 主要儀器設(shè)備
        2.1.6 試劑配制
    2.2 實驗方法
        2.2.1 HUVECs的培養(yǎng)與傳代
        2.2.2 構(gòu)建LPS致內(nèi)皮功能障礙模型
        2.2.3 IL-35 處理HUVECs
        2.2.4 小鼠動物實驗
        2.2.5 標(biāo)本采集與處理
    2.3 檢測指標(biāo)
        2.3.1 流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡
        2.3.2 蛋白芯片
        2.3.3 RT-PCR
        2.3.4 Western Blot
        2.3.5 Elisa操作流程
        2.3.6 免疫組化染色
    2.4 數(shù)據(jù)處理
第3章 結(jié)果
    3.1 不同濃度IL-35對HUVECs的影響
    3.2 人炎癥因子蛋白芯片分析HUVECs中炎癥因子的表達(dá)
    3.3 IL-35在LPS誘導(dǎo)的內(nèi)皮功能障礙中的保護作用
        3.3.1 RT-qPCR檢測VCAM-1、ICAM-1、IL-6和IL-8mRNA的水平
        3.3.2 WB檢測VCAM-1、ICAM-1、IL-6和IL-8 蛋白表達(dá)水平
    3.4 過表達(dá)IL-35 改善內(nèi)皮功能障礙
        3.4.1 小鼠體內(nèi)IL-35 的表達(dá)情況
        3.4.2 IL-35 減輕炎癥反應(yīng)
        3.4.3 過表達(dá)IL-35 降低血管內(nèi)皮黏附分子
    3.5 IL-35 改善內(nèi)皮功能障礙的機制
        3.5.1 IL-35 促進STAT1和STAT4 的磷酸化
        3.5.2 IL-35 促進STAT1和STAT4 之間的相互作用
        3.5.3 Fludarabine抑制可逆轉(zhuǎn)IL-35 對內(nèi)皮功能障礙的保護作用
        3.5.4 siRNA的轉(zhuǎn)染效率及其干擾效果
        3.5.5 干擾STAT4 的表達(dá)可逆轉(zhuǎn)IL-35 對內(nèi)皮功能障礙的保護作用
第4章 討論
    4.1 白介素-35
    4.2 IL-35 在內(nèi)皮功能障礙中的作用
    4.3 在體內(nèi)實驗中內(nèi)皮黏附分子以及炎癥指標(biāo)的變化
    4.4 IL-35 通過活化STAT1和STAT4 信號傳導(dǎo)改善內(nèi)皮功能障礙
    4.5 IL-35 的應(yīng)用前景
第5章 結(jié)論與展望
    5.1 結(jié)論
    5.2 本研究的不足及進一步設(shè)想
        5.2.1 研究中的不足
        5.2.2 進一步設(shè)想
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間的研究成果
綜述
    參考文獻(xiàn)



本文編號：3150829