目的:甲型血友病,即血友病A,是凝血因子Ⅷ缺乏或功能缺陷所導(dǎo)致的X連鎖隱性出血性疾病,主要累及男性,在男性人群的發(fā)病率約為1/5000�；颊咧饕憩F(xiàn)為反復(fù)自發(fā)性或外傷后出血。其中,重型甲型血友病患者臨床出血嚴(yán)重,凝血因子Ⅷ凝血活性（FⅧ:C）<1%,FⅧ制劑替代治療費用高。因此,開展重型甲型血友病患者基因診斷具有重要意義。F8基因是目前公認的甲型血友病致病基因,人類基因突變數(shù)據(jù)庫已經(jīng)報道了3000多種F8基因突變,遺傳異質(zhì)性高,無突變熱點,突變類型包括無義突變、錯義突變、剪接突變、插入、缺失、倒位等。其中,內(nèi)含子22倒位和內(nèi)含子1倒位是發(fā)生率較高的可重復(fù)性突變,也是重型甲型血友病的主要發(fā)病分子機制。本研究擬對35例重型甲型血友病患者進行F8基因倒位檢測、突變篩查及功能分析,為進一步豐富F8基因突變數(shù)據(jù)庫、揭示重型甲型血友病分子機制提供理論依據(jù)。研究方法:以35例重型甲型血友病患者為研究對象,通過長距離聚合酶鏈反應(yīng)（LD-PCR）和雙管多重PCR檢測F8基因內(nèi)含子22和內(nèi)含子1倒位。倒位陰性患者通過PCR結(jié)合DNA測序開展F8基因突變篩查。新的c.670+1G>A剪接突變功能... 

【文章來源】：中國醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：51 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
1 前言
2 材料和方法
    2.1 主要試劑和儀器
        2.1.1 主要試劑
        2.1.2 主要儀器
    2.2 研究對象
    2.3 基因組DNA提取
    2.4 F8基因內(nèi)含子22倒位檢測
        2.4.1 引物
        2.4.2 長距離聚合酶鏈反應(yīng)（LD-PCR）
    2.5 F8基因內(nèi)含子1倒位檢測
        2.5.1 引物
        2.5.2 雙管多重PCR
    2.6 F8基因突變篩查
        2.6.1 引物
        2.6.2 PCR
        2.6.3 DNA測序及序列分析
        2.6.4 生物信息學(xué)分析
A剪接突變功能分析">    2.7 c.670+1G>A剪接突變功能分析
        2.7.1 野生型和突變型F8 minigene表達載體構(gòu)建
        2.7.2 基因轉(zhuǎn)染
        2.7.3 RNA提取
        2.7.4 反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）
3 結(jié)果
    3.1 F8基因內(nèi)含子22倒位檢測結(jié)果
    3.2 F8基因內(nèi)含子1倒位檢測結(jié)果
    3.3 F8基因突變篩查結(jié)果
A剪接突變功能分析結(jié)果">    3.4 c.670+1G>A剪接突變功能分析結(jié)果
4 討論
5 結(jié)論
附錄
本論文創(chuàng)新性的自我評價
參考文獻
綜述
    參考文獻
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個人簡歷



本文編號：3149952