第一部分BCR-ABL1陽性微泡的生物學特征及內(nèi)容物分析目的：微泡（MV）是一種新型的細胞間信息交流載體,具有豐富的生物學功能；MV的生物學功能由其攜帶的內(nèi)容物決定,不同應(yīng)激條件下MV的內(nèi)容物存在較大差異,是細胞的一種適應(yīng)性機制。本部分研究擬以K562細胞為代表,了解慢性髓性白血病（CML）來源MV的生物學特性以及主要包含的內(nèi)容物,明確其功能指向；同時探討應(yīng)激狀態(tài)下K562細胞及其MV中miRNA表達譜等內(nèi)容物的改變。方法：體外培養(yǎng)K562細胞,采用梯度離心法收集MV；離心獲得的沉淀物以透射電鏡觀察,流式細胞儀分析其大小和表面標志,同時采用PKH-26及CFSE等熒光染料染色沉淀物后于激光共聚焦和熒光顯微鏡下觀察；經(jīng)鑒定是MV后提取其中的RNA,實時定量PCR檢測其中的BCR-ABL1表達,熒光原位雜交（FISH）檢測其中的染色體片段；在此基礎(chǔ)上,采用低血清培養(yǎng)刺激K562細胞并收集其來源的MV,以正常培養(yǎng)的K562細胞及其MV作為對照,芯片檢測四個樣本中的miRNA表達譜；對比分析不同狀態(tài)下MV中miRNA表達譜的差異,生物信息學分析差異niRNA分子可能參與的生物學行為。最后,構(gòu)建... 

【文章來源】：華中科技大學湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：119 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

小歲手術(shù)過程

圖2.流式細胞儀檢測K562-MV.流式細胞儀以l.Oum微球設(shè)門，發(fā)現(xiàn)所檢測的MV大小均在1.0師以下，其中300nm、500nm和800nm是主要大小分布區(qū)，每個分布區(qū)的MV均攜帶有Annexin V分子的表達。2.饑餓應(yīng)激對K562細胞及其MV中miRNA表達譜的影響前期提取并送檢的RNA經(jīng)質(zhì)控后均合格，提示從MV能夠有效獲取足量mRNA及miRNA供芯片檢測(圖3)。根據(jù)信號檢測到的所有位點的熒光強度，去除和背景信號無顯著性差異的探針點后選取有效數(shù)據(jù)。通過對比實驗組和對照組之間相同有效位點的信號強度比值即倍數(shù)差異（foldchange, FC,取FC>=2和FC<=0.5為有統(tǒng)計學意義），我們共在K562細胞和MV中均檢出了 977種miRNA的前體分子，四個樣本間具有顯著性差異的miRNA數(shù)見表1。[ru] 叫_|40_ ‘丨 30-30-20- ,20-10-0- ?一'、 .丄一上sT- 0 ‘ Y'"卞 I I I I I I"“‘ I I I I ‘ ‘ ‘ ‘ ‘ ‘ J ： [“"“^ ‘“20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 [s] 20 25 30 35 -10 45 50 55 60 65 (sj

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本文編號：3144136