目的探討髓過氧化物酶（MPO）對單核巨噬細胞（THP-1）、活性及基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）、組織金屬蛋白酶抑制劑1（TIMP-1）表達的影響。方法 2018年12月-2019年3月于�？谑腥嗣襻t(yī)院暨湘雅醫(yī)學院附屬�？卺t(yī)院中心實驗室進行實驗,設THP-1為對照組、MPO低、中、高劑量組（MPO終濃度分別為1.5、3.0、6.0μ/L）,各組每孔設6個平行樣,培養(yǎng)72 h。試驗結(jié)束后,MTT法測定細胞活力,流式細胞儀測定細胞凋亡水平,實時熒光逆轉(zhuǎn)錄法（RT-PCR）及蛋白印跡法（WESTERN-BLOT）測定細胞MMP-9、TIMP-1基因和蛋白水平。結(jié)果與對照組比較,MPO低、中、高劑量組OD值、存活率水平明顯升高（P<0.05）,且隨著MPO劑量逐漸增加,各組OD值、存活率逐漸升高（P<0.05）。與對照組比較,MPO低、中、高劑量組凋亡率水平降低（P<0.05）,且隨著MPO劑量逐漸增加,各組凋亡率逐漸降低（P<0.05）。與對照組比較,MPO低、中、高劑量組MMP-9 mRNA和蛋白表達水平明顯升高（P<0.05）,TIMP-1mRNA和蛋白表... 

【文章來源】：新疆醫(yī)科大學學報. 2020,43(04)

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【部分圖文】：

各組THP-1巨噬細胞凋亡情況

動脈粥樣硬化是全球過早死亡病例的主要原因。臨床、遺傳和流行病學證據(jù)表明,低密度脂蛋白(LDL)水平升高是應激的一個重要危險因素,而來自巨噬細胞的負載泡沫細胞是動脈粥樣硬化的病理學標志。體外試驗中,LDL未能將巨噬細胞轉(zhuǎn)化為負載泡沫細胞,這說明LDL必須經(jīng)過修飾才能發(fā)揮致病作用。氧化途徑是改變LDL的一種重要機制,研究表明MPO與LDL氧化修飾密不可分[10]。MPO使由中性粒細胞、單核細胞、巨噬細胞群分泌的血紅素蛋白。分子細胞學試驗表明,由MPO-過氧化物系統(tǒng)體外修飾的LDL被巨噬細胞清道夫受體攝取;MPO存在于人類動脈粥樣硬化組織中,與巨噬細胞共定位;這些觀察結(jié)果提供了MPO活躍于人類動脈粥樣硬化組織的強有力證據(jù),LDL是其目標之一[11]。臨床試驗觀察到,在冠狀動脈疾病的受試者中,MPO的血液水平升高,其預測不穩(wěn)定型心絞痛患者心肌梗死的風險;在體外降低MPO表達的啟動子多態(tài)性與臨床事件風險降低相關(guān)[12]。在小鼠動脈粥樣硬化組織中的巨噬細胞用蛋白質(zhì)印跡檢測到高水平MPO。本研究結(jié)果顯示,與對照組比較,MPO低、中、高劑量組OD值、存活率水平升高,且隨著MPO劑量逐漸增加,MPO各劑量組OD值、存活率明顯升高。與對照組比較,MPO低、中、高劑量組凋亡率水平降低,且隨著MPO劑量逐漸增加,MPO各劑量組凋亡率明顯降低。這與上述討論一致,同時提示MPO可促進巨噬細胞增殖,抑制其凋亡。MMP-9前體可由單核細胞、巨噬細胞、血管平滑肌細胞、成纖維細胞等多種細胞分泌。已有研究發(fā)現(xiàn),MMP-9免疫染色主要集中于巨噬細胞,且在動脈粥樣硬化斑塊的肩部和泡沫細胞聚集的部位中MMP-9表達及分泌增加[13]。而單核-巨噬細胞等大量的炎癥細胞浸潤是易損斑塊的特征之一,這說明MMP-9參與了動脈粥樣硬化疾病的進展。而既往通過染色發(fā)現(xiàn)在破裂處存在大量MPO侵潤,提示在不穩(wěn)定斑塊中同時存在大量的MPO與MMP-9。MMP-9在動脈粥樣硬化斑塊發(fā)展中起重要作用[14-15]。TIMP-1是MMP-9的抑制劑,在斑塊不穩(wěn)定性的調(diào)節(jié)中,如小鼠的敲除或過表達的研究中發(fā)現(xiàn),TIMP-1腺病毒過表達導致動脈粥樣硬化病變區(qū)域減少;腺病毒TIMP-1過表達能明顯降低頭臂動脈斑塊的大小,由于斑塊中彈性蛋白含量增加,表明向更穩(wěn)定的斑塊表型發(fā)生了變化[16]。TIMP-1過表達可以抑制動脈粥樣硬化病變的形成,TIMP-1過表達導致體內(nèi)MMPS活性顯著降低,在小鼠靜脈移植物中MMP-2、MMP-7、MMP-9、MMP-12、MMP-13其活性明顯降低[17]。更重要的是,TIMP-1的過度表達導致靜脈移植損傷大小減少,巨噬細胞和纖維蛋白含量減少,膠原和平滑肌細胞含量增加,最終導致斑塊破裂并發(fā)癥減少90%[18]。本研究結(jié)果顯示,與對照組比較,MPO低、中、高劑量組MMP-9 mRNA和蛋白表達升高,TIMP-1mRNA和蛋白表達降低;且隨著MPO劑量逐漸增加,MPO各劑量組MMP-9 mRNA和蛋白表達水平明顯升高,TIMP-1mRNA和蛋白表達明顯降低。這說明,MPO可促進巨噬細胞MMP-9 mRNA和蛋白表達,抑制TIMP-1mRNA和蛋白表達,進而加重動脈粥樣硬化病變進展。

【參考文獻】：
期刊論文
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