發(fā)布時間：2021-04-07 05:02

　　目的：應(yīng)用分子生物學的方法,在細胞水平觀察促紅細胞生成素（erythropoietinEPO）對高糖環(huán)境誘導(dǎo)下體外培養(yǎng)的乳鼠心肌細胞（Cardiomyocytes CM）的影響。方法：1、分離培養(yǎng)新生乳鼠心肌細胞并鑒定：①分離培養(yǎng)新生乳鼠心肌細胞并鑒定：取新生乳鼠心室肌組織后,以0.1%胰蛋白酶及0.5g/LⅡ型膠原蛋白酶復(fù)合消化分離心肌細胞,差速貼壁45min分離純化心肌細胞,加入100μmol/L Brdu抑制非心肌細胞的生長以提高心肌細胞純度。②觀察培養(yǎng)心肌細胞的活性：電子顯微鏡下觀察細胞,可見細胞規(guī)律搏動即心肌細胞活性好。③進行細胞鑒定：心肌細胞爬片用明膠或?qū)诱尺B蛋白包被的細胞爬片進行,細胞爬片后用免疫組化SABC法進行鑒定,免疫組化結(jié)果應(yīng)為:a-actin陽性,證實為心肌細胞（CM）。2、取分離培養(yǎng)的心肌細胞隨機分為：①對照組：5.5mmol/L葡萄糖；②高糖組：25mmol/L葡萄糖；③EPO+高糖組：20u/mlEPO+25mmol/L葡萄糖,72h后行下一步實驗。3、心肌細胞肥大的檢測：軟件計算心肌細胞表面積,濃度。4、[3H]-亮氨酸滲入測,5、心肌細胞β-MHC m... 

【文章來源】：昆明醫(yī)科大學云南省

【文章頁數(shù)】：52 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

心肌細胞3H-leu滲入量


本文編號：3122851