目的:骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植被認(rèn)為是一種安全有效的缺血性心臟病的治療方法。越來越多的證據(jù)顯示BMSCs移植對心肌梗死有療效。但缺血、缺氧、炎癥等導(dǎo)致移植細(xì)胞的存活率低,從而限制了其療效。因此,促進(jìn)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的增殖和存活對于提高骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植療效具有重要作用。血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）是促進(jìn)血管生成因子,促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移和存活。有研究表明,VEGF在心肌梗死后可增加血流,改善心功能。而且,VEGF在心肌梗死后BMSCs移植中也起著關(guān)鍵作用。因此,調(diào)節(jié)VEGF的分泌可能會影響B(tài)MSCs移植的療效。梓醇（Catalpol）是從中藥地黃中分離出來的一種活性化合物,據(jù)報道具有廣泛的生物學(xué)活性,包括降血糖、神經(jīng)保護(hù)、抗衰老、抗腫瘤作用。此外,之前的一項(xiàng)研究表明梓醇可促進(jìn)大鼠腦卒中模型中VEGF介導(dǎo)的血管生成。研究還表明,梓醇能促進(jìn)多種細(xì)胞的存活和抑制細(xì)胞凋亡。根據(jù)上述背景,我們推測梓醇在心肌梗死中可能提高BMSCs的生存和VEGF的分泌、提高移植療效。在這項(xiàng)研究中,我們探索梓醇能否保護(hù)BMSCs對抗缺氧缺血性損傷,以及移植到心肌梗死大鼠后,是否促進(jìn)心肌梗死大鼠的療效。研究方... 

【文章來源】：中國醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

BMSCs表型的鑒定

說明成功分離和培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。3.2 梓醇對氧糖剝奪的 BMSCs 體外 VEGF 分泌的影響ELISA 檢測各組的 BMSCs 分泌 VEGF 情況如下所示（圖 1.2A，表 1.1）。細(xì)胞培養(yǎng)上清中 VEGF 的含量在氧糖剝奪刺激組明顯增加，但是沒有統(tǒng)計學(xué)意義；梓醇預(yù)處理的氧糖剝奪的 BMSCs 可以劑量依賴型的增加 VEGF 分泌。與 BMSCs+OGD組比較，BMSCs+ OGD+梓醇中組增加顯著（##P<0.01），BMSCs+ OGD+梓醇高組增加極其顯著（###P<0.001）。另外，Western Blot 檢測各組細(xì)胞中 VEGF-A、HIF-1α 蛋白水平情況（圖 1.2B-D，表 1.2）。HIF-1α 在細(xì)胞核和細(xì)胞漿均有表達(dá)，我們檢測了細(xì)胞核HIF-1α和細(xì)胞總的HIF-1α蛋白的灰度表達(dá)情況，β-actin、HistoneH3、β-actin 為相對應(yīng)的內(nèi)參，HIF-1α 與內(nèi)參相距較大，因此分開電泳。如圖 1.2B-D 和表 1.2 所示，VEGF-A 在梓醇中、高濃度的氧糖剝奪的 BMSCs 組、總的 HIF-1α 蛋白水平在梓醇高濃度的氧糖剝奪 BMSCs 組顯著上調(diào)。

11圖 1.3 梓醇在氧糖剝奪條件下促進(jìn) BMSCs 體外存活圖 1.3A 為 CCK-8 檢測各組 BMSCs 活性 BMSCs+OGD 組較 BMSCs 組細(xì)胞活性顯著降（ ***P<0.001），而與 BMSCs+OGD 組比較 ，BMSCs+OGD+Catalpol M 組和 BMSOGD+Catalpol H 組細(xì)胞活性上調(diào)（#P<0.05，##P<0.01）；圖 1.3BC 流式細(xì)胞術(shù)檢測各組細(xì)胞凋亡情況 B 為流式檢測細(xì)胞凋亡細(xì)胞分布散點(diǎn)圖C 圖為由流式凋亡檢測得到的細(xì)胞凋亡百分比，由圖可見，BMSCs+OGD 組細(xì)胞凋亡比例BMSCs 組細(xì)胞顯著升高（***P<0.001），而與 BMSCs+OGD 組比較，梓醇處理后，所有組細(xì)凋亡比例降低極其顯著（###P<0.001）；圖 1.3D-G Western Blot 檢測各組細(xì)胞中凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)情況 與 BMSCs 組比較BMSCs+OGD 組 Bcl-2 蛋白表達(dá)量顯著降低（***P<0.001），Bax 和 cleaved caspase-3 蛋白表量顯著升高（***P<0.001）；與 BMSCs+OGD 組比較，BMSCs+OGD+CatalpolM 組和 BMS


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