第一部分:生理和病理情況下cTnⅠ的核移位現(xiàn)象目的:由TNNI3基因編碼的心肌肌鈣蛋白I（Cardiac troponin I,cTnⅠ）過去一直被認(rèn)為是一種胞漿蛋白,但本課題組前期研究和文獻(xiàn)報道肌鈣蛋白（Troponin I,TnⅠ）可以進(jìn)入細(xì)胞核。此部分實驗旨在驗證TnⅠ核移位現(xiàn)象的普遍性,及探討生理和病理情況下核移位比值的改變。方法:1、以c57小鼠為研究對象,通過對其心臟組織的核漿蛋白分離,將心肌組織蛋白分離為核蛋白（Nu）、漿蛋白（Cy）,利用WB檢測核蛋白及漿蛋,白內(nèi)cTnⅠ的表達(dá);2、以11w、14w人胎兒為研究對象,通過對其心臟組織的核漿蛋白分離,將心肌組織蛋白分離為核蛋白、漿蛋白,利用WB檢測核蛋白及漿蛋白內(nèi)TnⅠ的表達(dá);3、以c57小鼠原代心肌細(xì)胞為研究對象,通過免疫熒光技術(shù)檢測cTnⅠ的入核現(xiàn)象及核移位比值;4、以SD大鼠為研究對象,分為左心室和右心室心臟組織,通過提取總蛋白和核漿蛋白分離,利用WB檢測總蛋白與核蛋白內(nèi)cTnⅠ的表達(dá)并統(tǒng)計核移位比值;5、以SD大鼠為研究對象,通過主動脈縮窄術(shù)（TAC）分為假手術(shù)組（Sham組）和以左心衰為主要病理改變的TAC術(shù)組,... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：85 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

WB檢測小鼠心肌細(xì)胞漿核內(nèi)cTnI蛋白的表達(dá)

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文2 結(jié)果2.1 小鼠及人胚胎心臟組織中 cTnI 的核移位現(xiàn)象通過試劑盒分離的核漿蛋白純度要求是 WB 檢測胞漿蛋白中幾乎不含有核內(nèi)參 Histone H3，核蛋白中幾乎不含有漿內(nèi)參α-Tubulin；cTnI 蛋白在小鼠、胎兒心肌細(xì)胞胞漿蛋白和核蛋白中均有所表達(dá)，如下圖（圖 1A-B）；免疫熒光檢測小鼠原代心肌細(xì)胞內(nèi) cTnI 的表達(dá)，cTnI 存在核移位，入核比約 30.43±1.073%（圖1C-D）。

29圖 1D：免疫熒光統(tǒng)計的核內(nèi)的 cTnI 占比istics of red fluorescence intensity in the cytop理情況下 cTnI 入核比胞內(nèi)cTnI 入核比較右心室肌細(xì)胞顯著增C 術(shù)后（左心衰）左心室肌細(xì)胞內(nèi) cTnI（n=3，p=0.0305）（圖 2C-D）。


本文編號：3109697