目的通過研究重型再生障礙性貧血（Severe Aplastic Anemia, SAA）患者外周血CD3+T淋巴細胞中T細胞活化銜接因子（Linker for activation of T cells, LAT）表達水平、LAT的表達與SAA患者CD8+T細胞功能的關(guān)系以及LAT在T細胞中的作用機制,證實LAT與SAA患者T細胞過度增殖及功能亢進之間的因果效應(yīng),進一步闡明SAA免疫損傷骨髓造血的機制,為開發(fā)SAA靶向治療提供理論依據(jù)。方法研究對象為天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院2012年9月至2013年9月初治SAA患者14例、治療后緩解的SAA患者12例及正常對照者12例。第一部分研究SAA患者外周血T細胞中LAT的表達水平及其與CD8+T細胞功能的關(guān)系,采用流式細胞術(shù)檢測14例初治SAA患者、12例治療后緩解的患者及12例正常對照者外周血T細胞LAT及其相關(guān)信號分子ZAP-70及pLAT的表達,以及外周血CD8+T細胞中LAT的表達水平及穿孔素（perforin）和顆粒酶B（granzyme B）的表達。采用免疫磁珠分選以上病例外周血CD3+T細胞,實時定量PCR檢測分選細胞LAT mRNA... 

【文章來源】：天津醫(yī)科大學(xué)天津市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
縮略語/符號說明
前言
    研究現(xiàn)狀、成果
    研究目的、方法
+T細胞中LAT表達水平的變化">一、重型再生障礙性貧血患者外周血CD3⁺T細胞中LAT表達水平的變化
    1.1 對象和方法
        1.1.1 研究對象
        1.1.2 主要試劑與儀器
        1.1.3 研究方法
+T細胞">            1.1.3.1 免疫磁珠分選CD3⁺T細胞
            1.1.3.2 流式細胞儀檢測分選細胞純度
            1.1.3.3 實時定量PCR
            1.1.3.4 流式細胞儀檢測外周血T亞群比例
            1.1.3.5 流式細胞儀檢測SAA患者外周血T細胞中LAT及其相關(guān)信號分子的表達
+T細胞內(nèi)穿孔素和顆粒酶B的表達">            1.1.3.6 流式細胞儀檢測SAA患者外周血CD8⁺T細胞內(nèi)穿孔素和顆粒酶B的表達
    1.2 結(jié)果
        1.2.1 流式細胞儀檢測分選細胞
+T細胞內(nèi)LATmRNA的表達">        1.2.2 實時定量PCR技術(shù)檢測SAA患者外周血CD3⁺T細胞內(nèi)LATmRNA的表達
+T細胞內(nèi)LAT及其相關(guān)信號分子ZAP-70和pLAT的表達">        1.2.3 流式細胞術(shù)檢測SAA患者外周血CD3⁺T細胞內(nèi)LAT及其相關(guān)信號分子ZAP-70和pLAT的表達
+T細胞比例與CD3⁺T細胞內(nèi)LAT的表達的相關(guān)性">        1.2.4 所有病例外周血CD3⁺T細胞比例與CD3⁺T細胞內(nèi)LAT的表達的相關(guān)性
+T細胞功能與CD8⁺T細胞內(nèi)LAT的表達的相關(guān)性">        1.2.5 所有病例外周血CD8⁺T細胞功能與CD8⁺T細胞內(nèi)LAT的表達的相關(guān)性
    1.3 討論
    1.4 小結(jié)
二、LAT在重型再生障礙性貧血T細胞中的作用機制
    2.1 對象和方法
        2.1.1 研究對象
        2.1.2 主要試劑與儀器
        2.1.3 研究方法
            2.1.3.1 免疫磁珠分選CD3+T細胞
            2.1.3.2 流式細胞儀檢測分選細胞純度
+T細胞">            2.1.3.3 LAT-siRNA轉(zhuǎn)染SAA患者CD3⁺T細胞
+T細胞">            2.1.3.4 pCMV-myc-LAT質(zhì)粒轉(zhuǎn)染健康對照CD3⁺T細胞
+T細胞內(nèi)LAT的表達">            2.1.3.5 流式細胞術(shù)檢測轉(zhuǎn)染前后CD3⁺T細胞內(nèi)LAT的表達
+T細胞內(nèi)穿孔素和顆粒酶B的表達">            2.1.3.6 流式細胞術(shù)檢測轉(zhuǎn)染前后CD8⁺T細胞內(nèi)穿孔素和顆粒酶B的表達
            2.1.3.7 Annexin V&PI試劑盒檢測K562細胞的凋亡
            2.1.3.8 ELISA法檢測培養(yǎng)上清液中IL-4濃度
            2.1.3.9 ELISA法檢測培養(yǎng)上清液中IFN-γ濃度
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 流式細胞儀檢測分選細胞
+T細胞及CD8⁺T細胞功能的測定">        2.2.2 LAT敲低組中CD4⁺T細胞及CD8⁺T細胞功能的測定
+T細胞及CD8⁺T細胞功能的測定及K562細胞凋亡的測定">        2.2.3 LAT過表達組中CD4⁺T細胞及CD8⁺T細胞功能的測定及K562細胞凋亡的測定
    2.3 討論
    2.4 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻
發(fā)表論文和參加科研情況說明
附錄
綜述
    綜述參考文獻
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]重型再生障礙性貧血患者外周血自然殺傷細胞亞群百分比及功能變化[J]. 李志賞,邵宗鴻,付蓉,王珺,李麗娟,張?zhí)?王化泉,吳玉紅,阮二寶,宋嘉,瞿文,劉鴻,邢莉民,王曉明,梁勇,關(guān)晶,王國錦.  中華醫(yī)學(xué)雜志. 2011 (16)
[2]Fas系統(tǒng)與部分凋亡相關(guān)性疾病關(guān)系的研究進展[J]. 邢智偉,李云霞.  醫(yī)學(xué)綜述. 2010(01)
[3]再生障礙性貧血的研究[J]. 邵宗鴻.  基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床. 2007(03)
[4]重型再生障礙性貧血患者Th3細胞、調(diào)節(jié)T細胞數(shù)量和轉(zhuǎn)化生長因子β1的水平[J]. 涂梅峰,邵宗鴻,劉鴻,何廣勝,付蓉,施均,白潔,曹燕然,王化泉,邢莉民,崔振珠,孫娟,賈海蓉,陳輝樹,薛艷萍,楊崇禮.  中華血液學(xué)雜志. 2006(11)
[5]重型再生障礙性貧血患者骨髓中輔助性T細胞亞群數(shù)量及功能的變化[J]. 何廣勝,邵宗鴻,和虹,劉鴻,白潔,施均,曹燕然,涂梅峰,孫娟,賈海蓉,楊崇禮.  中華血液學(xué)雜志. 2004(10)
[6]Th1細胞在再生障礙性貧血發(fā)病機制中的作用[J]. 和虹,邵宗鴻,何廣勝,劉鴻,施均,付蓉,趙明峰,白潔,賈海蓉,孫娟,崔振珠,儲榆林,楊天楹,楊崇禮.  中華血液學(xué)雜志. 2002(11)
[7]再生障礙性貧血患者骨髓造血干/祖細胞體外增殖分化特征的研究[J]. 陳桂彬,邵宗鴻,賈海蓉,張益枝,鄭以州,孫娟,儲榆林.  中華血液學(xué)雜志. 1999(10)
[8]嚴重型再生障礙性貧血患者骨髓和外周血 HLA-DR+T 細胞的變化及其淋巴細胞造血抑制活性的研究[J]. 夏長青,儲榆林,張君奎,邵宗鴻,田征,陳桂彬,湯曉培.  中華血液學(xué)雜志. 1997(04)
[9]重型再生障礙性貧血患者樹突細胞刺激異體淋巴細胞增殖的功能[J]. 王珺,邵宗鴻,付蓉,吳玉紅,邢莉民,王化泉.  中華內(nèi)科雜志. 2009 (12)



本文編號：3106179