目的通過(guò)研究重型再生障礙性貧血（Severe Aplastic Anemia, SAA）患者外周血CD3+T淋巴細(xì)胞中T細(xì)胞活化銜接因子（Linker for activation of T cells, LAT）表達(dá)水平、LAT的表達(dá)與SAA患者CD8+T細(xì)胞功能的關(guān)系以及LAT在T細(xì)胞中的作用機(jī)制,證實(shí)LAT與SAA患者T細(xì)胞過(guò)度增殖及功能亢進(jìn)之間的因果效應(yīng),進(jìn)一步闡明SAA免疫損傷骨髓造血的機(jī)制,為開發(fā)SAA靶向治療提供理論依據(jù)。方法研究對(duì)象為天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院2012年9月至2013年9月初治SAA患者14例、治療后緩解的SAA患者12例及正常對(duì)照者12例。第一部分研究SAA患者外周血T細(xì)胞中LAT的表達(dá)水平及其與CD8+T細(xì)胞功能的關(guān)系,采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)14例初治SAA患者、12例治療后緩解的患者及12例正常對(duì)照者外周血T細(xì)胞LAT及其相關(guān)信號(hào)分子ZAP-70及pLAT的表達(dá),以及外周血CD8+T細(xì)胞中LAT的表達(dá)水平及穿孔素（perforin）和顆粒酶B（granzyme B）的表達(dá)。采用免疫磁珠分選以上病例外周血CD3+T細(xì)胞,實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)分選細(xì)胞LAT mRNA... 

【文章來(lái)源】：天津醫(yī)科大學(xué)天津市 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：72 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
縮略語(yǔ)/符號(hào)說(shuō)明
前言
    研究現(xiàn)狀、成果
    研究目的、方法
+T細(xì)胞中LAT表達(dá)水平的變化">一、重型再生障礙性貧血患者外周血CD3⁺T細(xì)胞中LAT表達(dá)水平的變化
    1.1 對(duì)象和方法
        1.1.1 研究對(duì)象
        1.1.2 主要試劑與儀器
        1.1.3 研究方法
+T細(xì)胞">            1.1.3.1 免疫磁珠分選CD3⁺T細(xì)胞
            1.1.3.2 流式細(xì)胞儀檢測(cè)分選細(xì)胞純度
            1.1.3.3 實(shí)時(shí)定量PCR
            1.1.3.4 流式細(xì)胞儀檢測(cè)外周血T亞群比例
            1.1.3.5 流式細(xì)胞儀檢測(cè)SAA患者外周血T細(xì)胞中LAT及其相關(guān)信號(hào)分子的表達(dá)
+T細(xì)胞內(nèi)穿孔素和顆粒酶B的表達(dá)">            1.1.3.6 流式細(xì)胞儀檢測(cè)SAA患者外周血CD8⁺T細(xì)胞內(nèi)穿孔素和顆粒酶B的表達(dá)
    1.2 結(jié)果
        1.2.1 流式細(xì)胞儀檢測(cè)分選細(xì)胞
+T細(xì)胞內(nèi)LATmRNA的表達(dá)">        1.2.2 實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)檢測(cè)SAA患者外周血CD3⁺T細(xì)胞內(nèi)LATmRNA的表達(dá)
+T細(xì)胞內(nèi)LAT及其相關(guān)信號(hào)分子ZAP-70和pLAT的表達(dá)">        1.2.3 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)SAA患者外周血CD3⁺T細(xì)胞內(nèi)LAT及其相關(guān)信號(hào)分子ZAP-70和pLAT的表達(dá)
+T細(xì)胞比例與CD3⁺T細(xì)胞內(nèi)LAT的表達(dá)的相關(guān)性">        1.2.4 所有病例外周血CD3⁺T細(xì)胞比例與CD3⁺T細(xì)胞內(nèi)LAT的表達(dá)的相關(guān)性
+T細(xì)胞功能與CD8⁺T細(xì)胞內(nèi)LAT的表達(dá)的相關(guān)性">        1.2.5 所有病例外周血CD8⁺T細(xì)胞功能與CD8⁺T細(xì)胞內(nèi)LAT的表達(dá)的相關(guān)性
    1.3 討論
    1.4 小結(jié)
二、LAT在重型再生障礙性貧血T細(xì)胞中的作用機(jī)制
    2.1 對(duì)象和方法
        2.1.1 研究對(duì)象
        2.1.2 主要試劑與儀器
        2.1.3 研究方法
            2.1.3.1 免疫磁珠分選CD3+T細(xì)胞
            2.1.3.2 流式細(xì)胞儀檢測(cè)分選細(xì)胞純度
+T細(xì)胞">            2.1.3.3 LAT-siRNA轉(zhuǎn)染SAA患者CD3⁺T細(xì)胞
+T細(xì)胞">            2.1.3.4 pCMV-myc-LAT質(zhì)粒轉(zhuǎn)染健康對(duì)照CD3⁺T細(xì)胞
+T細(xì)胞內(nèi)LAT的表達(dá)">            2.1.3.5 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后CD3⁺T細(xì)胞內(nèi)LAT的表達(dá)
+T細(xì)胞內(nèi)穿孔素和顆粒酶B的表達(dá)">            2.1.3.6 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后CD8⁺T細(xì)胞內(nèi)穿孔素和顆粒酶B的表達(dá)
            2.1.3.7 Annexin V&PI試劑盒檢測(cè)K562細(xì)胞的凋亡
            2.1.3.8 ELISA法檢測(cè)培養(yǎng)上清液中IL-4濃度
            2.1.3.9 ELISA法檢測(cè)培養(yǎng)上清液中IFN-γ濃度
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 流式細(xì)胞儀檢測(cè)分選細(xì)胞
+T細(xì)胞及CD8⁺T細(xì)胞功能的測(cè)定">        2.2.2 LAT敲低組中CD4⁺T細(xì)胞及CD8⁺T細(xì)胞功能的測(cè)定
+T細(xì)胞及CD8⁺T細(xì)胞功能的測(cè)定及K562細(xì)胞凋亡的測(cè)定">        2.2.3 LAT過(guò)表達(dá)組中CD4⁺T細(xì)胞及CD8⁺T細(xì)胞功能的測(cè)定及K562細(xì)胞凋亡的測(cè)定
    2.3 討論
    2.4 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
發(fā)表論文和參加科研情況說(shuō)明
附錄
綜述
    綜述參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]重型再生障礙性貧血患者外周血自然殺傷細(xì)胞亞群百分比及功能變化[J]. 李志賞,邵宗鴻,付蓉,王珺,李麗娟,張?zhí)?王化泉,吳玉紅,阮二寶,宋嘉,瞿文,劉鴻,邢莉民,王曉明,梁勇,關(guān)晶,王國(guó)錦.  中華醫(yī)學(xué)雜志. 2011 (16)
[2]Fas系統(tǒng)與部分凋亡相關(guān)性疾病關(guān)系的研究進(jìn)展[J]. 邢智偉,李云霞.  醫(yī)學(xué)綜述. 2010(01)
[3]再生障礙性貧血的研究[J]. 邵宗鴻.  基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床. 2007(03)
[4]重型再生障礙性貧血患者Th3細(xì)胞、調(diào)節(jié)T細(xì)胞數(shù)量和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1的水平[J]. 涂梅峰,邵宗鴻,劉鴻,何廣勝,付蓉,施均,白潔,曹燕然,王化泉,邢莉民,崔振珠,孫娟,賈海蓉,陳輝樹,薛艷萍,楊崇禮.  中華血液學(xué)雜志. 2006(11)
[5]重型再生障礙性貧血患者骨髓中輔助性T細(xì)胞亞群數(shù)量及功能的變化[J]. 何廣勝,邵宗鴻,和虹,劉鴻,白潔,施均,曹燕然,涂梅峰,孫娟,賈海蓉,楊崇禮.  中華血液學(xué)雜志. 2004(10)
[6]Th1細(xì)胞在再生障礙性貧血發(fā)病機(jī)制中的作用[J]. 和虹,邵宗鴻,何廣勝,劉鴻,施均,付蓉,趙明峰,白潔,賈海蓉,孫娟,崔振珠,儲(chǔ)榆林,楊天楹,楊崇禮.  中華血液學(xué)雜志. 2002(11)
[7]再生障礙性貧血患者骨髓造血干/祖細(xì)胞體外增殖分化特征的研究[J]. 陳桂彬,邵宗鴻,賈海蓉,張益枝,鄭以州,孫娟,儲(chǔ)榆林.  中華血液學(xué)雜志. 1999(10)
[8]嚴(yán)重型再生障礙性貧血患者骨髓和外周血 HLA-DR+T 細(xì)胞的變化及其淋巴細(xì)胞造血抑制活性的研究[J]. 夏長(zhǎng)青,儲(chǔ)榆林,張君奎,邵宗鴻,田征,陳桂彬,湯曉培.  中華血液學(xué)雜志. 1997(04)
[9]重型再生障礙性貧血患者樹突細(xì)胞刺激異體淋巴細(xì)胞增殖的功能[J]. 王珺,邵宗鴻,付蓉,吳玉紅,邢莉民,王化泉.  中華內(nèi)科雜志. 2009 (12)



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