目的:程序性壞死,也稱為壞死性凋亡,在心肌缺血/再灌注損傷（MIRI）中起重要作用。球狀脂聯(lián)素（gAd）是一種蛋白質(zhì)激素,其調(diào)節(jié)許多代謝過程并在心血管穩(wěn)態(tài)中起重要作用,包括在MIRI期間保護心肌細胞,但在缺氧/復氧條件下gAd對心肌細胞的保護機制仍不清楚。我們使用SD新生大鼠心室肌細胞（NRVMs）建立心肌缺氧/復氧模型,旨在研究gAd在缺氧/復氧誘導的細胞凋亡和壞死性凋亡中的作用方法:本實驗將gAd（0,0.5,1和2μg/ml,24小時）預處理培養(yǎng)的SD新生大鼠心室肌細胞（NRVM）暴露于缺氧/復氧條件下,然后分別使用MTT和LDH測定分析細胞活力和LDH水平;使用TUNEL染色的方法來區(qū)分細胞凋亡和壞死之間的發(fā)生的情況及比例;Western Blot用于評估細胞凋亡和程序性壞死相關蛋白的的表達水平（包括caspase3,RIP1,RIP3,p38/MAPK,NF-κB,Bcl-2和Bax等蛋白）。根據(jù)免疫熒光法來檢測活性氧（ROS）水平,然后分別通過丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）試劑盒來檢測其活性,從而評估氧化應激。結果:1.gAd通過增加細胞活力和細胞數(shù)量,減少LD... 

【文章來源】：山西醫(yī)科大學山西省

【文章頁數(shù)】：40 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
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前言
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 實驗細胞
        1.1.2 實驗分組
        1.1.3 主要試劑
        1.1.4 試劑盒
        1.1.5 主要耗材及儀器
    1.2 實驗方法
        1.2.1 主要試劑的配置
        1.2.2 細胞缺氧/復氧培養(yǎng)
        1.2.3 細胞活力測定
        1.2.4 caspase3免疫熒光和TUNEL雙染色
        1.2.5 NF-κB免疫熒光染色
        1.2.6 乳酸脫氫酶（LDH）
        1.2.7 原位檢測活性氧（ROS）
        1.2.8 T-SOD和MDA的測量
        1.2.9 Western blotting測定蛋白表達
        1.2.10 數(shù)據(jù)統(tǒng)計和分析
2 結果
    2.1 球狀脂聯(lián)素減輕缺氧/復氧誘導的新生大鼠心室肌細胞損傷
    2.2 gAd可以抑制缺氧/復氧誘導的程序性壞死和細胞凋亡
    2.3 球狀脂聯(lián)素通過減弱細胞凋亡和程序性壞死來保護缺氧/復氧誘導的細胞損傷
    2.4 球形脂聯(lián)素在減輕缺氧/復氧誘導的心肌細胞凋亡和程序性壞死中的合理作用
    2.5 球狀脂聯(lián)素可以通過減少ROS的產(chǎn)生,減少缺氧/復氧誘導的細胞損傷
    2.6 球狀脂聯(lián)素主要通過p38MAPK/NF-κB信號通路抑制缺氧/復氧誘導的心肌細胞凋亡和程序性壞死
3 討論
4 結論
參考文獻
綜述 脂聯(lián)素及其受體在心血管疾病中的作用和機制研究進展
    參考文獻
致謝
在學期間承擔/參與的科研課題與研究成果
    承擔/參與的科研課題
    研究成果
個人簡歷



本文編號：3085977