本文關(guān)鍵詞：Corin介導(dǎo)的pro-ANP活化途徑與糖尿病心肌病關(guān)系的實(shí)驗(yàn)研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的糖尿病(diabetes mellitus,DM)是一組以慢性血糖水平增高為特征的代謝性疾病,是由于胰島素分泌和/或作用缺陷所引起。隨著糖尿病發(fā)病率的逐年上升,其并發(fā)的糖尿病心肌病(diabetic cardiomyopathy,DCM)也日益受到人們重視。糖尿病心肌病是糖尿病常見(jiàn)的心血管并發(fā)癥,是糖尿病患者心力衰竭及猝死的首要原因,其典型臨床癥狀是心臟增大、心律失常,較易發(fā)生充血性心力衰竭,而其發(fā)病機(jī)制目前尚不完全清楚。Corin是一種主要在心臟表達(dá)的絲氨酸蛋白酶,能夠高度特異的將心房鈉尿肽原(pro-atrial natriuretic peptide,pro-ANP)轉(zhuǎn)化為有活性的心房鈉尿肽(atrial natriuretic peptide,ANP)。ANP是一種可以促進(jìn)腎臟排鈉、排水和舒張血管平滑肌的多肽類激素,主要在心房肌細(xì)胞中合成,其與心力衰竭和高血壓的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。研究發(fā)現(xiàn),Corin基因缺失或表達(dá)減少與重大心血管疾病如心力衰竭、心肌肥厚及高血壓等的發(fā)病密切相關(guān)。但心臟酶Corin介導(dǎo)的pro-ANP活化途徑在糖尿病心肌病中是否發(fā)揮作用,目前尚不清楚。因此,本課題采用鏈脲佐菌素(streptozotocin,STZ)構(gòu)建的糖尿病心肌病SD大鼠動(dòng)物模型、高糖誘導(dǎo)的乳鼠原代心肌細(xì)胞及高糖誘導(dǎo)的H9c2心肌細(xì)胞株,從整體、細(xì)胞、分子等不同層面,通過(guò)體內(nèi)、體外實(shí)驗(yàn)研究,探討Corin介導(dǎo)的pro-ANP活化途徑與糖尿病心肌病之間的關(guān)系。方法1.一次性腹腔注射STZ構(gòu)建糖尿病SD大鼠動(dòng)物模型;2.超聲心動(dòng)圖、血流動(dòng)力學(xué)及大鼠心臟重量與體重的比值(心重/體重,HW/BW)檢測(cè),以鑒定糖尿病心肌病SD大鼠動(dòng)物模型;3.透射電子顯微鏡觀察大鼠心肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的改變;4.RT-PCR和Real-Time PCR檢測(cè)Corin及ANP m RNA在DCM大鼠心肌組織中的表達(dá);5.Western Blot和免疫組織化學(xué)檢測(cè)Corin及ANP蛋白在DCM大鼠心肌組織中的表達(dá);6.Western Blot檢測(cè)Corin及ANP在注射STZ后第12、16、20和33周的DCM大鼠心肌組織中的表達(dá);7.ELISA檢測(cè)DCM大鼠血漿中N末端心房鈉尿肽原(N-terminal pro-atrial natriuretic peptide,NT-pro ANP)的濃度;8.Real-Time PCR檢測(cè)Corin和ANP m RNA在高糖誘導(dǎo)的乳鼠原代心肌細(xì)胞中的表達(dá);9.Western Blot和細(xì)胞免疫熒光染色檢測(cè)Corin和ANP蛋白在高糖誘導(dǎo)的乳鼠原代心肌細(xì)胞中的表達(dá);10.Western Blot檢測(cè)Corin和ANP蛋白在高糖誘導(dǎo)36 h、48 h和60 h的乳鼠原代心肌細(xì)胞中的表達(dá);11.Western Blot檢測(cè)Corin和ANP蛋白在高糖誘導(dǎo)36 h、48 h和60 h的H9c2心肌細(xì)胞株中的表達(dá)。結(jié)果1.成功構(gòu)建糖尿病SD大鼠動(dòng)物模型:STZ注射一周后,DCM組大鼠隨機(jī)血糖水平大于16.7 mmol/L,尿糖陽(yáng)性,且出現(xiàn)多飲、多食、多尿現(xiàn)象。與Ctrl組大鼠相比,DCM組大鼠隨機(jī)血糖水平明顯升高(P0.01),體重明顯降低(P0.01)。2.成功構(gòu)建糖尿病心肌病SD大鼠動(dòng)物模型:超聲心動(dòng)圖檢查顯示,與Ctrl組大鼠相比,DCM組大鼠IVSd、LVPWd與LVIDd均減弱(P0.05),LVIDs明顯升高(P0.01),FS%與EF%均明顯降低(P0.01);血流動(dòng)力學(xué)檢查結(jié)果顯示,DCM組大鼠+dp/dt與-dp/dt明顯低于Ctrl組(P0.01),MABP無(wú)明顯差異(P0.05);DCM組HW/BW值明顯高于Ctrl組(P0.01);3.在透射電子顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn),Ctrl組大鼠心肌組織肌纖維排列規(guī)則,心肌細(xì)胞形態(tài)正常,超微結(jié)構(gòu)完整,線粒體包膜完整,線粒體嵴分布均勻;而DCM組大鼠心肌組織肌纖維排列紊亂,心肌細(xì)胞形態(tài)異常,超微結(jié)構(gòu)改變明顯,線粒體包膜輪廓不清,亦可見(jiàn)線粒體包膜破損,線粒體嵴分布不均,線粒體嵴間距增大,甚至可見(jiàn)線粒體破潰死亡,可見(jiàn)較多糖原沉積;4.大鼠心肌組織RT-PCR及Real-Time PCR結(jié)果顯示,DCM組Corin和ANP m RNA表達(dá)水平均明顯低于Ctrl組(P0.05);5.大鼠心肌組織Western Blot及免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示,DCM組Corin和ANP蛋白表達(dá)水平均明顯低于Ctrl組(P0.05);6.大鼠心肌組織Western Blot結(jié)果顯示,隨著DCM大鼠周齡的增加,Corin和ANP蛋白表達(dá)水平逐漸降低;7.大鼠血漿ELISA結(jié)果顯示,DCM組血漿NT-pro ANP濃度明顯低于Ctrl組(P0.01);8.乳鼠原代心肌細(xì)胞Real-Time PCR結(jié)果顯示,高糖(high glucose,HG)組誘導(dǎo)的乳鼠原代心肌細(xì)胞中Corin和ANP m RNA表達(dá)水平明顯低于正常對(duì)照(normal glucose,Ctrl)組(P0.01);9.乳鼠原代心肌細(xì)胞Western Blot及細(xì)胞免疫熒光染色結(jié)果顯示,HG組Corin和ANP蛋白表達(dá)水平均明顯低于Ctrl組(P0.05);10.乳鼠原代心肌細(xì)胞Western Blot結(jié)果顯示,隨著高糖環(huán)境誘導(dǎo)時(shí)間的延長(zhǎng),Corin和ANP蛋白表達(dá)水平逐漸降低;11.H9c2心肌細(xì)胞株Western Blot結(jié)果顯示,隨著高糖環(huán)境誘導(dǎo)時(shí)間的延長(zhǎng),Corin和ANP蛋白表達(dá)水平逐漸降低。結(jié)論1.成功構(gòu)建糖尿病SD大鼠動(dòng)物模型;2.成功構(gòu)建糖尿病心肌病SD大鼠動(dòng)物模型;3.在糖尿病心肌病中,Corin及ANP m RNA表達(dá)水平下降;4.在糖尿病心肌病中,Corin及ANP蛋白表達(dá)水平下降;5.Corin介導(dǎo)的pro-ANP活化途徑參與到糖尿病心肌病發(fā)病過(guò)程中,并與糖尿病心肌病病程密切相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：Corin心房鈉尿肽 活化途徑 心肌細(xì)胞 糖尿病心肌病
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R587.2;R542.2
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-12
• 縮略語(yǔ)/符號(hào)說(shuō)明12-14
• 前言14-20
• 研究現(xiàn)狀、成果14-19
• 研究目的、方法19-20
• 對(duì)象和方法20-39
• 結(jié)果39-52
• 討論52-57
• 結(jié)論57-58
• 參考文獻(xiàn)58-63
• 附錄63-66
• 發(fā)表論文和參加科研情況說(shuō)明66-67
• 綜述 Corin與心血管疾病的研究進(jìn)展67-74
• 綜述參考文獻(xiàn)70-74
• 致謝74-75
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷75

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本文編號(hào)：307403