研究背景及目的衰老是心血管疾病的獨(dú)立危險因素,包括冠心病、高血壓、中風(fēng)。伴隨著年齡的增加,機(jī)體內(nèi)會發(fā)生很多年齡相關(guān)的功能和結(jié)構(gòu)改變,其中內(nèi)皮功能紊亂是動脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展的起始階段。但是血管細(xì)胞,尤其是內(nèi)皮細(xì)胞,是如何出現(xiàn)衰老表型,衰老是如何影響血管功能并導(dǎo)致衰老相關(guān)的血管疾病,這一過程仍需要大量的研究。微小RNA （MicroRNAs, miRNAs）是一類小的非編碼RNA,在調(diào)節(jié)內(nèi)皮細(xì)胞衰老方面發(fā)揮重要調(diào)控作用。已知的芯片結(jié)果發(fā)現(xiàn)miR-216a/miR-18 1b在衰老的內(nèi)皮細(xì)胞中表達(dá)上調(diào),但其作用機(jī)制仍不清楚。研究方法1.原代培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（Human umbilical vein endothelial cells, HUVECs）,建立HUVECs衰老模型。實(shí)時熒光定量PCR在PDL8及PDL44內(nèi)皮細(xì)胞中檢測miR-216a/miR-181b,比較其表達(dá)水平。2.通過病毒感染建立穩(wěn)定高表達(dá)miR-216a的內(nèi)皮細(xì)胞系,檢測衰老相關(guān)的β半乳糖苷酶（Senescence Associated β-Galactosidase, SA-β-gal）活性、細(xì)胞周期蛋白表達(dá)水平... 

【文章來源】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖４．?ＨＵＶＥＣｓ衰老指標(biāo)的檢測

圖４．?ＭｉＲ－２１６ａ誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞出現(xiàn)衰老表型。Ａ．?ＰＤＬ８，?ＰＤＬ１２，?ＰＤＬ１６，ＰＤＬ２０的??８八－｜３－３３１染色結(jié)果；８．高表達(dá)加民－２１６３的？〇１＾２０１１１；￥６〔５藍(lán)染細(xì)胞比例較對照增??加６１％；?Ｃ隨著傳代次數(shù)的增加，藍(lán)染細(xì)胞逐漸増多；Ｄ，Ｅ．在ＰＤＬ８和ＰＤＬ２０??ＨＵＶＥＣｓ中，ｐ５３，?ｐ２１表達(dá)量明顯上調(diào)；Ｆ．在ＰＤＬ８和ＰＤＬ２０?ＨＵＶＥＣｓ中，細(xì)胞??端粒長度未見明顯改變；Ｇ．在ＰＤＬ８和ＰＤＬ２０ＨＵＶＥＣＳ中，端巧酶活性分別下調(diào)??２３〇／〇，?１６％。＊尸＜０．０５，＊＊尸＜０．００１。〇＝３，結(jié)果用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。ＮＣ，ｎｅｇａｔｉｖｅ?ｃｏｎｔｒｏｌ。??４．?ＭｉＲ－２１６ａ調(diào)節(jié)內(nèi)皮細(xì)胞功能??為了觀察ｍｉＲ－２１６ａ對內(nèi)皮細(xì)胞功能的影響，我們用ＭＴＳ比色法檢測細(xì)胞增殖??功能、劃傷實(shí)驗檢測細(xì)胞遷移功能、粘附實(shí)驗檢測細(xì)胞粘附功能。??４．１?ＭｉＲ－２１６ａ抑制ＨＵＶＥＣｓ的増殖功能??為了研巧ｍｉＲ－２１６ａ對肌ＶＥＣｓ增殖功能的影響，我們采用ＭＴＳ比色法檢測??高表達(dá)?ｍＨｌ－２１６ａ?的?ＰＤＬ８?ＨＵＶＥＣｓ?和?ＰＤＬ２０?ＨＵＶＥＣｓ，?ｙｊ■及轉(zhuǎn)染?ｍｉＲ－２１６ａ?抑制劑??的ＰＤＬ４４?ＨＵＶＥＣｓ的增殖能力。結(jié)果表明，ｍｉＲ－２１６ａ可抑制ＰＤＬ２０?ＨＵＶＥＣｓ增殖??

的ＰＤＬ４４?ＨＵＶＥＣｓ的增殖能力。結(jié)果表明，ｍｉＲ－２１６ａ可抑制ＰＤＬ２０?ＨＵＶＥＣｓ增殖??功能１５％ＣＰ＜０．００１），反之，抑制ＰＤＬ４４?ＨＵＶＥＣｓ中的ｍｉＲ－２１６ａ能夠促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞??增殖１２％（片０．０２７）。提示，過表達(dá)ｍｉＲ－２１６ａ可抑制內(nèi)皮細(xì)胞的増殖功能（圖５）。??３７??


本文編號：3073075