研究目的:以免疫性血小板減少癥（Immune thrombocytopenia,ITP）患者及正常對(duì)照者（Normal control,NC）來源的骨髓間充質(zhì)細(xì)胞（Bone marrow mesenchymal cells,BMCs）作為研究對(duì)象,構(gòu)建巨核細(xì)胞體外分化模型及骨髓間充質(zhì)細(xì)胞-巨核細(xì)胞體外共培養(yǎng)模型,旨在研究ITP患者來源的BMCs在體外生存、增殖和細(xì)胞因子表達(dá)等方面有無異常,以及對(duì)于巨核細(xì)胞分化及凋亡等生物學(xué)行為的影響,從而了解在ITP中BMCs所存在的缺陷及其對(duì)于血小板生成支持作用的改變,為完善ITP的發(fā)病機(jī)制以及相關(guān)針對(duì)性治療提供新的方向。實(shí)驗(yàn)方法:骨髓樣本分別取自7名ITP患者及5名正常對(duì)照者,全骨髓貼壁培養(yǎng)法培養(yǎng)得到BMCs;流式細(xì)胞術(shù)（Flow cytometry,FCM）檢測(cè)細(xì)胞表面蛋白CD105、CD90、CD73、CD34、CD45、CD19、CD11b、HLA-DR的表達(dá)狀況,進(jìn)行表型鑒定;Cell counting Kit 8（CCK8）法檢測(cè)細(xì)胞增殖,Annexin V/PI雙染法檢測(cè)細(xì)胞基礎(chǔ)凋亡率,實(shí)時(shí)熒光定量PCR（RT-qPCR）及酶聯(lián)免疫吸附... 

【文章來源】：上海交通大學(xué)上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：80 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

體外培養(yǎng)的骨髓間充質(zhì)基質(zhì)細(xì)胞表型鑒定特征注：流式表面標(biāo)記鑒定顯示，ITP患者（n=5）及正常對(duì)照者（n=5）來源的體外培養(yǎng)的梭形貼壁生長(zhǎng)細(xì)胞均符合骨髓間充質(zhì)細(xì)胞表型鑒定標(biāo)準(zhǔn)，即高表達(dá)CD105、CD73、CD90（>90%）

ITP 患者（n=5)與正常對(duì)照（NC）（n=5)來源的 BMCs 體外增殖狀況比較。①P=0.039，②P=0.00P=0.007，與正常對(duì)照相比。圖 1-3 BMSCs 體外培養(yǎng)增殖及凋亡狀況Fig1-3 Cell proliferation curve of BMSCs when cultured in virto4.ITP 患者來源的骨髓間充質(zhì)細(xì)胞體外培養(yǎng)條件下細(xì)胞基礎(chǔ)凋亡增加收集培養(yǎng)至第三代的細(xì)胞，F(xiàn)CM 法分別檢測(cè)兩組不同來源細(xì)胞的基礎(chǔ)凋亡狀況，結(jié)果（圖 1-4）顯示，ITP 患者（n=5)來源的細(xì)胞的基礎(chǔ)凋亡率明顯高于正常對(duì)照（n=5）。（NC vs ITP: AV+PI-, 2.19±0.41 % vs 3.1±0.69%, P< 0.0AV+PI+,4.2±0.99% vs 6.74±0.93%, P< 0.01; AV+PI+/-, 6.39±1.25 % vs 9.84±1.53%, P0.01）。表明 ITP 患者來源的 BMCs 體外生存能力下降。

35ITP 患者（n=5)與正常對(duì)照（NC）（n=5)來源的 BMCs 體外培養(yǎng)基礎(chǔ)凋亡比較，結(jié)果顯示 ITP來源的細(xì)胞早期凋亡、晚期凋亡以及細(xì)胞總的凋亡率均明顯高于正常對(duì)照來源的細(xì)胞，①P=0.036，②P=0.003，③P=0.004，與正常對(duì)照相比。圖 1-4 BMCs 外培養(yǎng)凋亡狀況Fig1-4 Cell basal apoptosis rate of BMCs when cultured in virto4.ITP 患者來源的細(xì)胞部分與巨核系分化成熟相關(guān)的細(xì)胞因子表達(dá)缺陷在實(shí)驗(yàn)中，利用 RT-qPCR 檢測(cè) BMCs 內(nèi)上述與巨核系分化成熟相關(guān)的細(xì)胞因子基因表達(dá)狀況，結(jié)果(圖 1-5A）顯示，ITP（n=5)來源的 BMCs 中 IL-6 及 SCF的 mRNA 的表達(dá)量明顯減少（均 P< 0.001），而 IL-11、TPO 的基因的表達(dá)量與

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3050897