第一部分過表達GATA4小鼠骨髓間充質干細胞分泌外泌體改善心梗后心功能作用目的確定過表達GATA4小鼠骨髓間充質干細胞分泌的外泌體（exosome）體外向心肌細胞樣分化的能力及抗凋亡能力,體內進一步驗證體外結果。方法1、體外采用GATA4-BMSCs-exosome與BMSCs共同培養(yǎng),空載體-BMSCs-exosome與BMSCs共同培養(yǎng),BMSCs-exosome與BMSCs共同培養(yǎng)、BMSCs單獨培養(yǎng)及小鼠心肌細胞（CMC）單獨培養(yǎng)24小時、48小時、72小時后,首先定性的采用免疫熒光檢測心肌特異性抗原cTnT、α-actin、connexin 43、Desmin表達。并進一步采用RT-PCR的方法,定量檢測心肌特異性抗原cTnT、α-actin、connexin 43、Desmin表達。2、采用過表達GATA4-BMSCs分泌的exosome與心肌細胞共培養(yǎng),空載體-BMSCs分泌的exosome與心肌細胞共培養(yǎng),BMSCs分泌的exosome與心肌細胞共培養(yǎng)及心肌細胞用于低氧培養(yǎng)無血清培養(yǎng)誘導細胞凋亡作為陽性對照。同時準備正常條件下單獨培養(yǎng)的心肌細胞作為陰性對照。將上述各組培... 

【文章來源】：昆明理工大學云南省

【文章頁數(shù)】：131 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
英文縮略詞表
緒論
第一部分 過表達GATA4小鼠骨髓間充質干細胞分泌的exosome改善心梗心功能的作用
    第一節(jié) 材料
        1.1 實驗動物
        1.2 主要試劑
        1.3 主要儀器
    第二節(jié) 方法
        2.1 Exosome的提取方法
        2.2 BCA檢測exosome蛋白濃度
        2.3 ELISA檢測exosome純度
        2.4 電鏡檢測exosome形態(tài)
        2.5 Exosome與BMSCs共培養(yǎng)后免疫熒光染色檢測
        2.6 Exosome與BMSCs共培養(yǎng)后RT-PCR檢測心肌特異性分子
        2.7 采用流式細胞技術檢測細胞的凋亡率
        2.8 Western-blot檢測各凋亡因子的表達
        2.9 心臟彩超評估心梗心功能
        2.10 小動物活體成像評估心臟局部熒光強度
        2.11 番茄凝集素評估心臟血管密度
        2.12 Tunel技術評估心梗局部心肌細胞的凋亡數(shù)量
        2.13 免疫組化技術評估心梗心肌局部c-kit數(shù)量
    第三節(jié) 結果
        3.1 BCA檢測結果
        3.2 ELISA檢測結果
        3.3 Exosome電鏡結果
        3.4 共培養(yǎng)后免疫熒光結果
        3.5 RT-PCR實驗結果
        3.6 exosome抗凋亡結果
        3.7 Western-blot結果
        3.8 心臟彩超評估心梗心功能結果
        3.9 小動物活體成像結果
        3.10 番茄凝集素評估血管數(shù)量
        3.11 Tunel技術評估心梗部位心肌細胞凋亡數(shù)量
        3.12 免疫組化技術評估c-kit表達量結果
    第四節(jié) 討論
第二部分 采用Agilent microRNA芯片檢測過表達GATA4小髓間充質干細胞分泌exosome內有關細胞分化及抗凋亡的microRNA
    第一節(jié) 材料
        1.1 主要試劑
        1.2 主要儀器設備
    第二節(jié) 方法
        2.1 Agilent miRNA芯片檢測過程
    第三節(jié) 結果
        3.1 樣本質檢
        3.2 原始數(shù)據(jù)
        3.3 對原始數(shù)據(jù)行聚類分析
        3.4 對樣品行兩兩比較差異miRNA分析結果
        3.5 散點圖
        3.6 過表達GATA4-BMSCsexosome與空載體-BMSCsexosome差異microRNA對有關細胞分化及抗凋亡的microRNA統(tǒng)計
        3.7 根據(jù)差異microRNA完成GO分析
        3.8 根據(jù)microRNA對應的靶基因完成pathway分析
    第四節(jié) 討論
第三部分 采用TMT標記定量蛋白質組學分析過表達GATA4小鼠骨髓間充質干細胞分泌exosome內有關細胞分化及抗凋亡蛋白
    第一節(jié) 材料
        1.1 主要試劑
        1.2 主要儀器
    第二節(jié) 方法
        2.1 樣品制備
        2.2 基于液相色譜-質譜聯(lián)用技術的定量蛋白質組學研究
        2.3 生物信息學分析
    第三節(jié) 結果
        3.1 技術路線
        3.2 實驗結果總述
        3.3 定量數(shù)據(jù)總覽
        3.4 重復性分析
        3.5 蛋白注釋
        3.6 差異表達蛋白的功能分類
        3.7 差異表達蛋白的“分子功能”富集情況
        3.8 聚類分析
    第四節(jié) 討論



本文編號：3039806