發(fā)布時(shí)間：2021-02-18 16:34

　　第一部分過(guò)表達(dá)GATA4小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分泌外泌體改善心梗后心功能作用目的確定過(guò)表達(dá)GATA4小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分泌的外泌體（exosome）體外向心肌細(xì)胞樣分化的能力及抗凋亡能力,體內(nèi)進(jìn)一步驗(yàn)證體外結(jié)果。方法1、體外采用GATA4-BMSCs-exosome與BMSCs共同培養(yǎng),空載體-BMSCs-exosome與BMSCs共同培養(yǎng),BMSCs-exosome與BMSCs共同培養(yǎng)、BMSCs單獨(dú)培養(yǎng)及小鼠心肌細(xì)胞（CMC）單獨(dú)培養(yǎng)24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)后,首先定性的采用免疫熒光檢測(cè)心肌特異性抗原cTnT、α-actin、connexin 43、Desmin表達(dá)。并進(jìn)一步采用RT-PCR的方法,定量檢測(cè)心肌特異性抗原cTnT、α-actin、connexin 43、Desmin表達(dá)。2、采用過(guò)表達(dá)GATA4-BMSCs分泌的exosome與心肌細(xì)胞共培養(yǎng),空載體-BMSCs分泌的exosome與心肌細(xì)胞共培養(yǎng),BMSCs分泌的exosome與心肌細(xì)胞共培養(yǎng)及心肌細(xì)胞用于低氧培養(yǎng)無(wú)血清培養(yǎng)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡作為陽(yáng)性對(duì)照。同時(shí)準(zhǔn)備正常條件下單獨(dú)培養(yǎng)的心肌細(xì)胞作為陰性對(duì)照。將上述各組培... 

【文章來(lái)源】：昆明理工大學(xué)云南省

【文章頁(yè)數(shù)】：131 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
英文縮略詞表
緒論
第一部分 過(guò)表達(dá)GATA4小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分泌的exosome改善心梗心功能的作用
    第一節(jié) 材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.2 主要試劑
        1.3 主要儀器
    第二節(jié) 方法
        2.1 Exosome的提取方法
        2.2 BCA檢測(cè)exosome蛋白濃度
        2.3 ELISA檢測(cè)exosome純度
        2.4 電鏡檢測(cè)exosome形態(tài)
        2.5 Exosome與BMSCs共培養(yǎng)后免疫熒光染色檢測(cè)
        2.6 Exosome與BMSCs共培養(yǎng)后RT-PCR檢測(cè)心肌特異性分子
        2.7 采用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞的凋亡率
        2.8 Western-blot檢測(cè)各凋亡因子的表達(dá)
        2.9 心臟彩超評(píng)估心梗心功能
        2.10 小動(dòng)物活體成像評(píng)估心臟局部熒光強(qiáng)度
        2.11 番茄凝集素評(píng)估心臟血管密度
        2.12 Tunel技術(shù)評(píng)估心梗局部心肌細(xì)胞的凋亡數(shù)量
        2.13 免疫組化技術(shù)評(píng)估心梗心肌局部c-kit數(shù)量
    第三節(jié) 結(jié)果
        3.1 BCA檢測(cè)結(jié)果
        3.2 ELISA檢測(cè)結(jié)果
        3.3 Exosome電鏡結(jié)果
        3.4 共培養(yǎng)后免疫熒光結(jié)果
        3.5 RT-PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.6 exosome抗凋亡結(jié)果
        3.7 Western-blot結(jié)果
        3.8 心臟彩超評(píng)估心梗心功能結(jié)果
        3.9 小動(dòng)物活體成像結(jié)果
        3.10 番茄凝集素評(píng)估血管數(shù)量
        3.11 Tunel技術(shù)評(píng)估心梗部位心肌細(xì)胞凋亡數(shù)量
        3.12 免疫組化技術(shù)評(píng)估c-kit表達(dá)量結(jié)果
    第四節(jié) 討論
第二部分 采用Agilent microRNA芯片檢測(cè)過(guò)表達(dá)GATA4小髓間充質(zhì)干細(xì)胞分泌exosome內(nèi)有關(guān)細(xì)胞分化及抗凋亡的microRNA
    第一節(jié) 材料
        1.1 主要試劑
        1.2 主要儀器設(shè)備
    第二節(jié) 方法
        2.1 Agilent miRNA芯片檢測(cè)過(guò)程
    第三節(jié) 結(jié)果
        3.1 樣本質(zhì)檢
        3.2 原始數(shù)據(jù)
        3.3 對(duì)原始數(shù)據(jù)行聚類分析
        3.4 對(duì)樣品行兩兩比較差異miRNA分析結(jié)果
        3.5 散點(diǎn)圖
        3.6 過(guò)表達(dá)GATA4-BMSCsexosome與空載體-BMSCsexosome差異microRNA對(duì)有關(guān)細(xì)胞分化及抗凋亡的microRNA統(tǒng)計(jì)
        3.7 根據(jù)差異microRNA完成GO分析
        3.8 根據(jù)microRNA對(duì)應(yīng)的靶基因完成pathway分析
    第四節(jié) 討論
第三部分 采用TMT標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組學(xué)分析過(guò)表達(dá)GATA4小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分泌exosome內(nèi)有關(guān)細(xì)胞分化及抗凋亡蛋白
    第一節(jié) 材料
        1.1 主要試劑
        1.2 主要儀器
    第二節(jié) 方法
        2.1 樣品制備
        2.2 基于液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)的定量蛋白質(zhì)組學(xué)研究
        2.3 生物信息學(xué)分析
    第三節(jié) 結(jié)果
        3.1 技術(shù)路線
        3.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果總述
        3.3 定量數(shù)據(jù)總覽
        3.4 重復(fù)性分析
        3.5 蛋白注釋
        3.6 差異表達(dá)蛋白的功能分類
        3.7 差異表達(dá)蛋白的“分子功能”富集情況
        3.8 聚類分析
    第四節(jié) 討論



本文編號(hào)：3039806