研究背景與目的:高血壓導(dǎo)致的血管損傷是一種慢性低度的炎癥反應(yīng)過程,特別是越來越多的研究表明血管外膜細胞炎癥反應(yīng)不僅參與高血壓,而且還參與動脈粥樣硬化及血管再狹窄等多種血管病變過程。血管外周脂肪組織作為一重要的外膜組成成分,通過分泌多種生物活性物質(zhì)參與血管生理病理功能的調(diào)控。我們之前的研究發(fā)現(xiàn)血管外周組織分泌炎癥因子參與醋酸去氧皮質(zhì)酮（DOCA）-鹽高血壓模型的血管重塑調(diào)節(jié)。而炎癥因子的表達受到多種因素的調(diào)節(jié),包括轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)節(jié)和轉(zhuǎn)錄后水平的調(diào)節(jié),其中miRNA是新近來發(fā)現(xiàn)的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控因子。外周脂肪組織中miRNA是否參與調(diào)控血管炎癥仍不清楚。本研究擬在DOCA-鹽高血壓小鼠模型中發(fā)掘血管外周脂肪中與血管炎癥相關(guān)的miRNA,并研究其功能。研究方法:1.建立DOCA-鹽高血壓模型:C57雄性小鼠左側(cè)單側(cè)腎切除后,在肩胛骨處皮下埋入DOCA泵并給予高鹽飲水,模型建好后通過尾動脈測量血壓。蘇木素伊紅（H&E）染色和免疫熒光染色測定血管外周脂肪組織結(jié)構(gòu)和炎癥相關(guān)因子的表達。2.芯片篩選各組組織中差異表達miRNA,并通過LNA-RT-PCR方法驗證感興趣的miRNA。3.預(yù)測靶基因并通... 

【文章來源】：上海交通大學(xué)上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：113 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

瓊脂糖凝膠電泳鑒定克隆片段大小

m3.2.2 let-7b 對 293T 細胞中 pGL3-ADRB3-3’UTR 熒光素酶表達的影響共轉(zhuǎn)染的各組293T細胞的熒光素酶表達情況見圖16。共轉(zhuǎn)染pGL3-ADRB3-3’UTR，pRL-TK 和 control mimics 時，不同濃度梯度的 control mimics 對熒光素酶活性沒有影響（圖 16 A）。共轉(zhuǎn)染 pGL3-ADRB3-3’UTR，pRL-TK 和 let-7b mimics 情況下，let-7b對熒光素酶活性的抑制作用隨著濃度梯度的增加而增大，在 20nM let-7b 作用下，對熒光素酶活性的抑制作用即有統(tǒng)計學(xué)意義（p<0.001），其抑制效率達到 70%

上海交通大學(xué)博士學(xué)位論文中 AngII 在病理狀態(tài)下分泌增加，所以認為 AngII 有可能參與上調(diào)血管外周脂肪中 ADRB3 蛋白表達和促炎癥因子 OPN 的表達。因此，采用醛固酮(Aldo)、血管素 II（AngII）和去甲腎上腺素（NE）作為刺激因子，檢測其對脂肪細胞中 ADRB OPN 蛋白表達的影響。通過刺激分化成熟的脂肪細胞，發(fā)現(xiàn)醛固酮（Aldo）和血管緊張素 II（Ang II能引起脂肪細胞表達 ADRB3 蛋白和 OPN 蛋白，其中 Ang II 能夠顯著引起 ADRB OPN 表達的增加，醛固酮的作用不是很顯著。去甲腎上腺素（NE）刺激成熟的細胞并沒有引起 ADRB3 蛋白和 OPN 表達的升高（圖 20 A B D）。說明 NE 和醛固非是引起 ADRB3 蛋白表達升高的主要因素，脂肪細胞中 ADRB3 和 OPN 蛋白的是有可能血管緊張素 II 引起的。


本文編號：3026757