動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展過程中,均有不同程度的炎癥反應(yīng)的發(fā)生,內(nèi)皮細(xì)胞含有并釋放促進(jìn)組織損傷的炎癥分子。在炎癥環(huán)境下,由低氧環(huán)境發(fā)生的無氧糖酵解導(dǎo)致乳酸的積累,進(jìn)而導(dǎo)致病變區(qū)域pH的降低,這預(yù)示著酸性環(huán)境對動脈硬化的發(fā)生可能有重要的作用；溶血磷脂酰膽堿（LPC）是磷脂酰膽堿的衍生物,由磷脂酶A2（PLA2）催化磷脂酰膽堿（PC）的水解生成,LPC是氧化性低密度脂蛋白o(hù)x-LDL的主要成分,因此LPC在動脈硬化部位是高濃度的。研究表明,內(nèi)皮細(xì)胞中GPR4是一類重要的雙配體受體,在酸性環(huán)境中有重要的作用,如促進(jìn)粘附分子表達(dá),炎癥因子表達(dá)等。GPR4作為雙配體受體在內(nèi)皮細(xì)胞誘導(dǎo)炎癥因子表達(dá)的調(diào)控作用的分子機(jī)理仍然不明。本研究首次闡述了質(zhì)子感知受體GPR4在內(nèi)皮細(xì)胞炎癥因子表達(dá)過程中的一種新現(xiàn)象,這為能更好的理解動脈硬化的致病機(jī)理,為治療動脈硬化也可能提供潛在靶點。目的：研究質(zhì)子感知受體GPR4的活化對白細(xì)胞介素6（Interleukin-6,IL-6）、腫瘤壞死因子-α（Tumor Necrosis Factor, TNF-a）基因表達(dá)的調(diào)控作用及受體介導(dǎo)的信號通路,并探討在動脈粥樣硬化中的作... 

【文章來源】：內(nèi)蒙古大學(xué)內(nèi)蒙古自治區(qū) 211工程院校

【文章頁數(shù)】：76 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
目錄
英文縮略詞表
一 引言
二 材料與方法
    2.1 主要儀器設(shè)備
    2.2 主要試劑及實驗材料
    2.3 主要試劑的配制
    2.4 GPR4 cDNA的克隆與表達(dá)載體的構(gòu)建
    2.5 人質(zhì)子感知受體GPR4基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建
    2.6 GPR4基因干擾表達(dá)載體的篩選
    2.7 RT-PCR測定內(nèi)皮細(xì)胞中四種質(zhì)子感知受體mRNA表達(dá)
    2.8 過表達(dá)GPR4基因的HUVEC細(xì)胞及GPR4基因干擾的HUVEC細(xì)胞的建立
    2.9 LPC及酸性pH對GPR4誘導(dǎo)的炎癥因子表達(dá)的檢測
三 結(jié)果與分析
    3.1 人質(zhì)子感知受體GPR4 cDNA的克隆與克隆載體構(gòu)建
        3.1.1 人質(zhì)子感知受體GPR4 cDNA的PCR擴(kuò)增
        3.1.2 重組質(zhì)粒pCR2.1-GPR4的雙酶切鑒定
        3.1.3 重組質(zhì)粒pCR2.1-GPR4的測序鑒定
    3.2 人質(zhì)子感知受體GPR4基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建
        3.2.1 載體構(gòu)建示意圖
        3.2.2 重組表達(dá)載體pIRES-EGFP-GPR4雙酶切鑒定
        3.2.3 重組質(zhì)粒pIRES-EGFP-GPR4的測序鑒定
    3.3 HUVEC的形態(tài)生物學(xué)特征及生長曲線
        3.3.1 正常培養(yǎng)的HUVEC細(xì)胞圖
        3.3.2 HUVEC細(xì)胞生長曲線的繪制
    3.4 HUVEC細(xì)胞中四種質(zhì)子感知受體mRNA表達(dá)
    3.5 過表達(dá)GPR4基因的HUVEC細(xì)胞的建立
        3.5.1 顯微熒光照相
        3.5.2 熒光定量PCR相對定量結(jié)果
    3.6 GPR4基因干擾的HUVEC細(xì)胞的建立
        3.6.1 GPR4干擾載體轉(zhuǎn)染HUVEC顯微熒光照相
        3.6.2 熒光定量PCR相對定量結(jié)果
    3.7 ELISA檢測IL-6,TNF-α的表達(dá)
        3.7.1 IL-6標(biāo)準(zhǔn)曲線
        3.7.2 TNF-α標(biāo)準(zhǔn)曲線
        3.7.3 ELISA檢測IL-6、TNF-α的表達(dá)
    3.8 PTX對pH6.8通過GPR4誘導(dǎo)的IL-6,TNF-α的表達(dá)沒有影響
    3.9 NF-κB信號通路參與pH6.8通過GPR4誘導(dǎo)的IL-6,TNF-α的表達(dá)過程
四 討論
五 結(jié)論
附錄一
附錄二
參考文獻(xiàn)
文獻(xiàn)綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文與參與的科研項目



本文編號：3023466