外周血T細(xì)胞亞群構(gòu)成比例與冠狀動脈粥樣硬化關(guān)系的研究

發(fā)布時(shí)間：2017-04-12 18:01

本文關(guān)鍵詞：外周血T細(xì)胞亞群構(gòu)成比例與冠狀動脈粥樣硬化關(guān)系的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景：冠心病(coronary heart disease, CHD)是進(jìn)入二十世紀(jì)以來,人類健康和生命的最大威脅。但是,其發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明,成為阻礙其治療的重大障礙；針對其發(fā)病機(jī)制的研究,一直是心內(nèi)科的熱點(diǎn)。動脈粥樣硬化(atherosclerosis, AS)是心腦血管疾病的病理病變基礎(chǔ)。在其發(fā)展過程中,經(jīng)歷脂紋、脂斑、纖維斑塊、粥樣硬化斑塊等進(jìn)展時(shí)期。近年來臨床觀察發(fā)現(xiàn),冠心病終末期具有加速進(jìn)展的臨床表現(xiàn),表現(xiàn)為發(fā)病突然、風(fēng)險(xiǎn)度高等特點(diǎn)。如果救治不及時(shí),死亡率和致殘率明顯升高。分析其病理改變發(fā)現(xiàn)以易損斑塊為主要特征,斑塊不穩(wěn)定到破裂,發(fā)展迅速并引起瀑布樣血栓形成,導(dǎo)致疾病的快速和劇烈進(jìn)展。人們再次認(rèn)識到冠心病終末期具有加速演變和劇烈進(jìn)展的特點(diǎn),將這一類加速進(jìn)展階段的末期情況歸納為急性冠脈綜合癥(acute coronary syndrome, ACS)。冠心病在發(fā)病和進(jìn)展時(shí)期的隱蔽性大,而進(jìn)入終末期的致死率和致殘率明顯升高,對人們生活和工作構(gòu)成極大的損害。如何早期發(fā)現(xiàn)、早期防治以及有效的減少其發(fā)病率和致殘率,是我們關(guān)注的熱點(diǎn)問題。因?yàn)锳S的病變過程漫長,而終末期又具有進(jìn)展迅速的特點(diǎn)。人們發(fā)現(xiàn)其發(fā)病過程與創(chuàng)傷、腫瘤和炎癥及自身免疫性疾病都具有一定的相似點(diǎn),使得對AS的發(fā)病和進(jìn)展機(jī)制有了種種不同的推測；但是,各種學(xué)說都在解釋AS的發(fā)生發(fā)展過程中都遇到一定的困難,準(zhǔn)確闡明AS發(fā)病機(jī)制成為研究熱點(diǎn)。近期,人們對ACS患者體內(nèi)活化免疫細(xì)胞和細(xì)胞因子的檢測以及對AS各個(gè)時(shí)期病變中活化免疫細(xì)胞檢測中,發(fā)現(xiàn)冠心病終末期患者不僅僅在斑塊病變局部可以檢測到大量活化T淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞,其外周血中也可以檢測到前炎癥因子的高水平表達(dá),提示在AS的終末階段,出現(xiàn)全身炎癥反應(yīng)增強(qiáng)的表現(xiàn),又根據(jù)活化T淋巴細(xì)胞的出現(xiàn),使得人們對炎癥和免疫參與疾病發(fā)生、發(fā)展成為關(guān)注的熱點(diǎn)。改良的冠狀動脈Gensini評分通過冠狀動脈造影術(shù)對冠狀動脈病變支數(shù)和狹窄程度積分,可以較客觀的反映冠狀動脈病變程度。實(shí)驗(yàn)表明,機(jī)體免疫功能紊亂可能參與急性心肌梗死的發(fā)生,間接或直接引起梗死面積擴(kuò)大或并發(fā)癥的發(fā)生,臨床上檢測T淋巴細(xì)胞亞群可反映機(jī)體免疫功能的狀況。CD4+細(xì)胞具有協(xié)助體液免疫和細(xì)胞免疫功能,它通過分泌大量的細(xì)胞因子和促使B細(xì)胞產(chǎn)生抗體來發(fā)揮其免疫學(xué)功能。CD8+細(xì)胞分為殺傷性T細(xì)胞和抑制性T細(xì)胞,其中CD8+抑制性T細(xì)胞,具有抑制體液免疫和細(xì)胞免疫的功能。它們相互協(xié)調(diào),相互制約,共同參與對機(jī)體免疫應(yīng)答的調(diào)節(jié)作用,它們在活性、數(shù)量、比例上的變化與疾病的發(fā)展、演變均有關(guān)系。只有在CD4+/CD8+比值正常時(shí),才能發(fā)揮正常的免疫學(xué)作用,二者共同維持免疫系統(tǒng)的平衡。最近的研究顯示,CD4+CD28-T細(xì)胞參與斑塊不穩(wěn)定和急性冠狀動脈事件的發(fā)生。與穩(wěn)定性心絞痛相比,急性冠脈綜合癥患者外周血CD4+CD28-T細(xì)胞亞群明顯增加。激活的免疫細(xì)胞、變薄的纖維帽、膠原基質(zhì)的溶解及平滑肌細(xì)胞的凋亡均與動脈粥樣硬化斑塊不穩(wěn)定有關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)CD4+CD28-T細(xì)胞在穩(wěn)定斑塊中不存在,僅存在于不穩(wěn)定斑塊,提示CD4+CD28-T細(xì)胞與斑塊破裂有直接的關(guān)系。目前有關(guān)調(diào)節(jié)CD4+CD28-T細(xì)胞優(yōu)先聚集于小穩(wěn)定斑塊處的確切機(jī)制尚不明確,動脈粥樣斑塊中的大部分T細(xì)胞包括CD4+CD28-T細(xì)胞分泌IFN-γ,促進(jìn)巨噬細(xì)胞分化為泡沫細(xì)胞及其它抗原提呈細(xì)胞,激活的巨噬細(xì)胞釋放基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinases, MMPs)及其它酶可引起斑塊破裂,同時(shí)由CD4+CD28-T淋巴細(xì)胞分泌的γ-干擾素(Interferon-γ, IFN-γ)能增加平滑肌細(xì)胞表達(dá)MHC-Ⅱ類分子,增強(qiáng)動脈粥樣硬化的炎癥反應(yīng)過程。除此之外,IFN-γ能有力抑制成纖維細(xì)胞分泌膠原并抑制平滑肌細(xì)胞增生,而且CD4+CD28-T淋巴細(xì)胞具有直接溶解內(nèi)皮細(xì)胞及平滑肌細(xì)胞的作用而導(dǎo)致斑塊破裂。這些因素相互作用導(dǎo)致了斑塊不穩(wěn)定性增加,導(dǎo)致斑塊易破裂。與CD4+CD28-T細(xì)胞亞群作用相反,CD4+CD25+Treg是最近研究發(fā)現(xiàn)的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞亞群之一。這類特殊的T細(xì)胞亞群與病理性效應(yīng)性T細(xì)胞之間的平衡在機(jī)體維持自身免疫應(yīng)答穩(wěn)態(tài)方面起到重要作用。人體主要是通過調(diào)節(jié)性T細(xì)胞,最主要的是CD4+CD25+Treg,以免疫負(fù)向調(diào)節(jié)的方式來抑制自身反應(yīng)性T細(xì)胞的作用,減少免疫性疾病的發(fā)生,從而維持免疫耐受。Sakaguchi等研究發(fā)現(xiàn)輸入去除CD4+CD25+Treg的小鼠可以出現(xiàn)嚴(yán)重的多器官自身免疫性疾病。CD4+CD25+Treg可以阻止出生后3天摘除胸腺的小鼠發(fā)生器官特異性的自身免疫反應(yīng)。這說明CD4+CD25+Treg在產(chǎn)生和保持外周自身免疫耐受方面起支柱作用。目的：本研究擬通過檢測不同臨床分型CHD患者外周血T細(xì)胞亞群比例,探討外周血T細(xì)胞亞群構(gòu)成比例與冠狀動脈粥樣硬化的關(guān)系及相關(guān)性,進(jìn)一步豐富T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的免疫炎癥反應(yīng)誘導(dǎo)斑塊進(jìn)展的理論依據(jù)。方法： 1.一般資料：選擇2012年6月至2012年12月于南方醫(yī)科大學(xué)珠江醫(yī)院心內(nèi)科住院的患者共57例,其中男41例,女16例。所有入選患者均行冠狀動脈造影檢查。根據(jù)以下標(biāo)準(zhǔn)分為4組： (1)對照組(control group),13例,有胸痛病史,經(jīng)體檢、心電圖及負(fù)荷試驗(yàn)、心臟超聲、CAG等檢查均未發(fā)現(xiàn)異常。 (2)穩(wěn)定型心絞痛(stable angina pectoris, SAP)組,14例,勞累性心絞痛發(fā)作性質(zhì)2月內(nèi)無改變,運(yùn)動試驗(yàn)陽性,CAG診斷為冠心病。 (3)不穩(wěn)定型心絞痛(unstable angina pectoris, UAP)組,15例,診斷為冠心病并符合下列條件：①靜息型心絞痛,持續(xù)時(shí)間20mmin；嚴(yán)重初發(fā)型心絞痛或惡化性心絞痛；②心絞痛發(fā)作時(shí),心電圖出現(xiàn)短暫的缺血性ST段改變,發(fā)作緩解后,ST段改變迅速恢復(fù)正常或接近正常。③cTnT陰性,梗死后心絞痛排除在外。 (4)急性心肌梗死(acute myocardial infarction, AMI)組,15例,根據(jù)臨床癥狀、心電圖改變及動態(tài)演變,單純右室梗死排除在外。CAG診斷為冠心病。 2.入選患者排除標(biāo)準(zhǔn)以下情況：此前6個(gè)月內(nèi)發(fā)生過心梗者；入院時(shí)心前區(qū)疼痛超過12小時(shí)者；合并腦卒中、嚴(yán)重的肝腎功能不全者；嚴(yán)重感染性疾病、自身免疫性疾病者；應(yīng)用免疫抑制藥物者,如非甾體類抗炎藥、類固醇及鴉片類等藥物者。 3.冠狀動脈造影及評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)：所有患者均行冠脈造影檢查,采用Judkins法,造影結(jié)果由2名有經(jīng)驗(yàn)的醫(yī)師分析完成。經(jīng)股動脈或橈動脈做冠脈造影,狹窄程度以直徑法表示,冠脈狹窄以心外膜下主要血管≥50%為有意義病變。冠脈狹窄50%者為對照組。采用改良Gensini標(biāo)準(zhǔn),對主要冠脈左主干、左前降支、左回旋支、右冠脈中任何一支狹窄進(jìn)行積分：≤25%為1.0分,26%～49%為1.5分,50%為2.0分,51%-74%為3.0分,75%為4.0分,76%～89%為6.0分,90%為8.0分,91%-98%為12.0分,99%為16.0分,100%為32.0分。不同節(jié)段冠脈評分系數(shù)按該標(biāo)準(zhǔn),冠脈病變程度的最終積分為各支積分之和。 4.外周血T淋巴細(xì)胞亞群檢測：五色熒光標(biāo)記流式細(xì)胞術(shù)(Flow Cytometry, FCM)檢測外周血CD3+細(xì)胞占淋巴細(xì)胞比例,CD4+、CD8+細(xì)胞占T淋巴細(xì)胞比例,以及CD4+CD25+Treg和CD4+CD28-T細(xì)胞占CD4+T細(xì)胞比例,計(jì)算CD4+/CD8+比值,評價(jià)各組間差異,并對外周血T淋巴細(xì)胞亞群與冠狀動脈粥樣硬化嚴(yán)重程度進(jìn)行相關(guān)性分析。 5.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：所有統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行處理。計(jì)量資料數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(X±s)表示,多組間比較采用單因素方差分析；若方差不齊采用Welch法,組間多重比較則采用Dunnetts' T3檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料用X2檢驗(yàn)。相關(guān)性分析采用Pearson法。以P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果： 1.研究對象的基線資料：4組患者間性別比例、年齡分布、高血壓患者比例、甘油三酯(triglyceride, TG)、空腹血糖(fasting plasma glucose, FPG)等方面比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P0.05)。血清總膽固醇(serum total cholesterol, TC)、尿酸(uric acid, UA)在AMI組與其他三組比較有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),三組間比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(均P0.05)；冠狀動脈Gensini評分在四組間相比存在極其顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(均P0.01)。 2.各組患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群構(gòu)成比例及比較 2.1各組患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群構(gòu)成比例： ①外周血CD3+細(xì)胞占淋巴細(xì)胞比例在對照組、SAP組、UAP組以及AMI組分別為(47.76±10.07)%,(56.61±7.49)%,(63.17±9.79)%和(70.17±10.59)%； ②外周血CD4+細(xì)胞占CD3+細(xì)胞比例在對照組、SAP組、UAP組以及AMI組分別為(41.44±9.14)%,(52.49±9.60)%,(62.54±9.32)%和(68.28±11.32)%; ③外周血CD8+細(xì)胞占CD3+細(xì)胞比例在對照組、SAP組、UAP組以及AMI組分別為(53.92±10.87)%,(44.66±9.86)%,(36.39±11.20)%和(31.10±9.54)%; ④外周血CD4+CD25+Treg占CD4+淋巴細(xì)胞比例在對照組、SAP組、UAP組以及AMI組分別為(57.51±12.62)%,(50.19±9.27)%,(39.85±11.88)%和(32.37±9.56)%； ⑤外周血CD4+CD28-細(xì)胞占CD4+淋巴細(xì)胞比例在對照組、SAP組、UAP組以及AMI組分別為(12.61±9.06)%,(13.04±6.44))%,(20.68±9.50)%和(22.65±11.55)%; ⑥外周血CD4+/CD8+比值在對照組、SAP組、UAP組以及AMI組分別為(0.81±0.27)、(1.26±0.43)、(2.03±1.27)、(2.56±1.40)。 2.2不同組別治療前外周血T淋巴細(xì)胞亞群水平比較：組間多重比較得出：①CD3+細(xì)胞占淋巴細(xì)胞比例,以及CD4+、CD8+細(xì)胞占T淋巴細(xì)胞比例,三指標(biāo)在AMI組、UAP組、SAP組較對照組存在顯著性差異(P0.05),其中CD4+CD8+細(xì)胞比例在AMI組、UAP組較SAP組及對照組存在極其顯著性差異(P0.01)；②CD4+CD25+Treg和CD4+CD28-T細(xì)胞占CD4+T細(xì)胞總數(shù)比例在AMI組、UAP組較SAP組、對照組存在顯著性差異(P0.05),而AMI組與UAP組之間,以及SAP組與對照組之間并無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P均0.05)。③CD4+/CD8+比值在AMI組、UAP組較SAP組、對照組存在顯著性差異(P0.05),而AMI組與UAP組之間,以及SAP組與對照組之間并無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P均0.05)。以上說明外周血T淋巴細(xì)胞亞群參介導(dǎo)的免疫反應(yīng)參與冠狀動脈粥樣硬化斑塊發(fā)生發(fā)展。 3.外周血T淋巴細(xì)胞亞群與冠狀動脈粥樣硬化病變程度(改良Gensini評分)的相關(guān)性分析：①患者外周血CD3+T細(xì)胞與Gensini評分呈顯著正相關(guān)(r=0.608,P0.01)；②外周血CD4+T細(xì)胞與Gensini評分呈顯著正相關(guān)(r=0.624,P0.01)；③外周血CD8+T細(xì)胞與Gensini評分呈顯著負(fù)相關(guān)(r=-0.548,P0.01)；④外周血CD4+CD25+Treg細(xì)胞與Gensini評分呈顯著負(fù)相關(guān)(r=-0.617,P0.01)；⑤外周血CD4+CD28-T細(xì)胞與Gensini評分呈正相關(guān),但相關(guān)關(guān)系不大(r=0.399,P0.01)；⑥外周血CD4+/CD8+與Gensini評分呈正相關(guān),但相關(guān)關(guān)系不大(r=0.435,P0.01)。結(jié)論：外周血T淋巴細(xì)胞亞群廣泛參與了冠狀動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展,其水平與冠狀動脈粥樣硬化嚴(yán)重程度密切相關(guān),其檢測有助于臨床病情判斷及預(yù)后預(yù)測。
【關(guān)鍵詞】：冠心病 動脈粥樣硬化 流式細(xì)胞術(shù) T淋巴細(xì)胞亞群
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R541.4
【目錄】：