背景:動脈粥樣硬化（Atherosclerosis,As）是動脈的慢性炎癥過程,其特征是修飾的低密度脂蛋白在血管壁沉積,導(dǎo)致動脈粥樣硬化斑塊的形成。它是心絞痛、心肌梗塞等急性心血管事件的主要原因。盡管動脈粥樣硬化的臨床診斷和治療取得很大進展,但斑塊形成的復(fù)雜過程給有效的診斷和治療帶來了巨大的挑戰(zhàn)。特異性的診斷方法及高效的治療手段成為動脈粥樣硬化的研究熱點。大量研究表明,巨噬細胞作為斑塊中的重要成分,是影響斑塊發(fā)展的重要調(diào)控靶點。巨噬細胞在吞噬大量修飾的低密度脂蛋白后轉(zhuǎn)變?yōu)榫奘杉毎葱耘菽毎�。泡沫細胞的遷移能力較低,大量滯留在內(nèi)膜下,進而導(dǎo)致粥樣斑塊和壞死核心形成,炎癥狀態(tài)加劇,斑塊持續(xù)發(fā)展。因此,促進泡沫細胞遷出有助于抑制斑塊進展。組織因子途徑抑制物（Tissue factor pathway inhibitor,TFPI）是組織因子介導(dǎo)的外源性凝血途徑的生理性抑制劑。研究證實,TFPI對斑塊發(fā)展的抑制作用與其下調(diào)血管內(nèi)皮細胞活化、血管平滑肌細胞的增殖和遷移以及炎癥因子的表達有關(guān)。研究顯示,TFPIct32作為TFPI的C端肽段,具有類似TFPI抗動脈粥樣硬化的作用,但是其具體作用機... 

【文章來源】：南華大學(xué)湖南省

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

泡沫細胞模型的鑒定

南華大學(xué)碩士學(xué)位論文20圖4.2TFPIct32對Raw264.7鼠巨噬細胞存活率的影響（Mean±SD）A:不同濃度TFPIct32對細胞存活率的影響，vs0nM組,**P<0.01，n=3。B:TFPIct32作用不同時間對細胞存活率的影響，vs0h組，##P<0.01，n=3。4.3TFPIct32促進泡沫細胞的遷移巨噬細胞在斑塊早期或者病變消退期間遷移，但在病變進展過程中會變成泡沫細胞，并且逐漸喪失遷移能力，滯留在斑塊內(nèi)。大量泡沫細胞的滯留促進斑塊內(nèi)脂質(zhì)核心的形成，進而加劇炎癥進展。采用Transwell和鬼筆環(huán)肽染色檢測TFPIct32對泡沫細胞遷移能力的影響。Transwell實驗結(jié)果顯示：與對照組相比，12.5nM的TFPIct32作用Raw264.7巨噬細胞24小時后，穿過小室的細胞數(shù)量增加146.94%(P<0.01)；同等摩爾TFPIs作用后，其穿過小室的細胞數(shù)量與對照組相比，差異無顯著性。細胞的的遷移運動與F-actin的聚合相關(guān)。當(dāng)F-actin聚合受阻，不能形成有效的突觸，會導(dǎo)致細胞運動能力下降。鬼筆環(huán)肽染色顯示：與對照組相比，經(jīng)TFPIct32處理后，泡沫細胞熒光強度增強49.05%(P<0.05)，泡沫細胞運動能力增強；TFPIs組與對照組相比，差異無顯著性。上述實驗結(jié)果表明，TFPIct32能夠促進巨噬細胞源性泡沫細胞的遷移（圖4.3）。AB

南華大學(xué)碩士學(xué)位論文22圖4.3TFPIct32促進巨噬細胞源性泡沫細胞的遷移A：經(jīng)氧化低密度脂蛋白預(yù)處理后，12.5nM的TFPIs與TFPIct32處理細胞24小時，Transwell實驗檢測穿過小室的細胞數(shù)量(如箭頭所示)（×40）；B：為每個視野細胞數(shù)的統(tǒng)計分析圖（Mean±SD），vsControl組，**P<0.01，n=3；C：經(jīng)氧化低密度脂蛋白預(yù)處理后，12.5nM的TFPIs與TFPIct32處理細胞24小時，鬼筆環(huán)肽染色檢測細胞熒光強度，如箭頭所示，Scalebar=75μm；D：為熒光強度統(tǒng)計分析圖（Mean±SD），vsControl組，*P<0.05，n=3。4.4TFPIct32促進泡沫細胞遷移的機制研究4.4.1TFPIct32上調(diào)泡沫細胞表面趨化因子受體CCR7的表達細胞的定向遷移受到細胞趨化因子的定向趨化作用和細胞膜上的趨化因子受體含量的調(diào)控。泡沫細胞受氧化低密度脂蛋白刺激后遷移能力下降，且其趨化因子受體CCR7的表達下調(diào)。趨化因子受體CCR7與其配體結(jié)合能誘導(dǎo)靶細胞細胞骨架重排及趨化性遷移。本實驗組前期動物實驗結(jié)果表明：小鼠主動脈組織和主動脈竇斑塊中CCR7的表達上調(diào)。因此，綜合文獻報道與前期實驗結(jié)果，推測TFPIct32對泡沫細胞遷移能力的促進與CCR7相關(guān)。首先進行TFPIct32處理的最佳濃度和時間的篩選，與之前篩選出來的濃度和時間一致。12.5nMTFPIct32處理24小時，通過qPCR和WB實驗檢測處理后CCR7的表達變化。結(jié)果顯示：與對照組相比，TFPIct32處理組CCR7的mRNA和蛋白表達水平分別升高397.21%和72.28%(P<0.01)，TFPIs組與對照組之間無顯著性差異（圖4.4）。D

【參考文獻】：
期刊論文
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[2]血管內(nèi)皮細胞屏障功能的血流動力學(xué)調(diào)控及其與動脈粥樣硬化的關(guān)系[J]. 瞿凱,邱菊輝,王貴學(xué).  中國動脈硬化雜志. 2020(01)
[3]巨噬細胞免疫代謝與動脈粥樣硬化的研究進展[J]. 陳羽斐,沈偉,施海明.  中國動脈硬化雜志. 2020(01)
[4]《中國心血管病報告2018》概要[J]. 胡盛壽,高潤霖,劉力生,朱曼璐,王文,王擁軍,吳兆蘇,李惠君,顧東風(fēng),楊躍進,鄭哲,陳偉偉.  中國循環(huán)雜志. 2019(03)
[5]冠心病靶向抗炎療法的研究新進展[J]. 羅鵬,吳延慶.  中國動脈硬化雜志. 2018(11)
[6]不要低估血管平滑肌細胞在動脈粥樣硬化斑塊形成中的作用[J]. 溫進坤.  中國動脈硬化雜志. 2018(07)
[7]組織因子途徑抑制物在動脈粥樣硬化中的作用[J]. 李輝,馬丹丹,傅羽.  中國動脈硬化雜志. 2016(03)
[8]巨噬細胞移出動脈粥樣硬化斑塊調(diào)控機制[J]. 蒲強紅,呂秋菊,王莉莉.  中國動脈硬化雜志. 2013(12)
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