目的明確在Islet-1誘導(dǎo)的間充質(zhì)干細(xì)胞（Mesenchymal stem cells,MSCs）向心肌樣細(xì)胞分化過程中組蛋白甲基化/乙�；虳NA甲基化修飾在調(diào)控心肌早期轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)中的作用,鑒定出三種修飾參與調(diào)控這些因子的關(guān)鍵酶,并初步探明這些關(guān)鍵酶在調(diào)控心肌早期轉(zhuǎn)錄因子過程中交互作用的機(jī)制。為提高M(jìn)SCs向心肌細(xì)胞的分化率以更好地應(yīng)用于臨床治療心血管疾病打下重要的實驗基礎(chǔ)。方法1.染色質(zhì)免疫共沉淀（Chromatin immunoprecipitation q PCR,Ch IP-q PCR）檢測轉(zhuǎn)染GATA4和Nkx2.5啟動子區(qū)組蛋白乙酰化/甲基化水平,以及三種修飾的關(guān)鍵酶與這些區(qū)域的結(jié)合情況2.甲基化特異性PCR（Methylation-Specific PCR,MSP）用以初步檢測GATA4和Nkx2.5啟動子區(qū)的DNA甲基化水平3.亞硫酸鹽測序（bisulfite sequencing PCR,BSP）對MSP中DNA甲基化水平變化明顯的樣本進(jìn)行驗證4.熒光定量PCR（fluorescence quantitative PCR,FQ-PCR）檢測GATA4和Nkx2.... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：89 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

1過表達(dá)Islet-1后GATA4和Nkx2.5啟動子區(qū)組蛋白乙酰化/甲基化水平（與Blank組相比，*P<0.05）

P 檢測 GATA4 和 Nkx2.5 啟動子區(qū)甲基化水平；B：BSP 驗證 GATA4 啟動位點甲基化水平圖 2.3.1.1 5-aza 處理后 GATA4 和 Nkx2.5 啟動子區(qū)甲基化水平的變化情況P detect DNA methylation level of GATA4 and Nkx2.5 promoter; B: BSP veri

34A：ChIP-qPCR 檢測 GATA4 和 Nkx2.5 啟動子區(qū)組蛋白乙�；�/甲基化水平；B：let-1+5-aza 組和 LV-islet-1 組 GATA4 和 Nkx2.5 啟動子區(qū)組蛋白乙酰化/甲基化水平C：FQ-PCR 檢測 GATA4 和 Nkx2.5 表達(dá)水平(與 LV-islet-1 組相比，#P<0.05).2.1 5-aza 處理后 GATA4 和 Nkx2.5 啟動子區(qū)組蛋白乙酰化/甲基化變化情況以及平的變化情況hIP-qPCR detect histone acetylation/methylation level in GATA4 and Nkx2.5 promistone acetylation/methylation level in GATA4 and Nkx2.5 promoter in LV-islet-1+p compared with LV-islet-1 group; C: FQ-PCR detect expression of GATA4 and N(#P<0.05, compared with LV-islet-1 group)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Effects of DNA Methylation and Histone Modification on Differentiation-associated Gene Expression in ES,NIH3T3,and NIT-1[J]. 方愛平,張悅,李明岳,郭輝,余小舫,李富榮,胡泓.  Journal of Huazhong University of Science and Technology（Medical Sciences）. 2011(01)
[2]組蛋白去乙�；福℉DACs）的研究進(jìn)展[J]. 夏靖,馮冰虹.  廣東藥學(xué)院學(xué)報. 2010(05)
[3]MSCs心肌樣細(xì)胞分化過程中GCN5募集促分化相關(guān)蛋白的篩選[J]. 周娜,朱靜,田杰,李婭莎,鄧兵,張亞蘭,智深深.  中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報. 2010(01)



本文編號：3000770