發(fā)布時(shí)間：2017-04-11 22:01

  本文關(guān)鍵詞：水蛭微粉防治動(dòng)脈粥樣硬化作用機(jī)制的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:通過(guò)構(gòu)建動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis,AS)大鼠病理模型,觀察水蛭微粉對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化大鼠體質(zhì)量、血脂、生長(zhǎng)因子、基質(zhì)金屬蛋白酶及血管平滑肌細(xì)胞不同表型標(biāo)志物表達(dá)的影響,探討其防治AS形成的作用及可能機(jī)制。方法:取健康雄性Wistar大鼠32只,適應(yīng)性飼喂1周后隨機(jī)分為4組:正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、水蛭微粉低劑量組、水蛭微粉高劑量組,每組各8只。正常對(duì)照組飼喂普通飼料,其余三組均飼喂高脂飼料,在喂食高脂飼料之前,除正常對(duì)照組外其余各組大鼠一次性腹腔注射維生素D3注射液60萬(wàn)IU·kg-1建立AS大鼠模型,正常對(duì)照組予以腹腔注射等量生理鹽水;高脂飼喂第二天水蛭微粉各治療組開(kāi)始按各自劑量藥物混懸液灌胃,每天1次,正常對(duì)照組和模型對(duì)照組大鼠只灌胃等量蒸餾水。第5周第一天,高脂飼料各喂養(yǎng)組再次腹腔注射維生素D3注射液30萬(wàn)IU·kg-1,正常對(duì)照組予以腹腔注射等量生理鹽水。每周稱體質(zhì)量一次,據(jù)體質(zhì)量調(diào)整藥物用量,持續(xù)8周。實(shí)驗(yàn)結(jié)束,處死所有大鼠,留取血清、主動(dòng)脈等組織,檢測(cè)血清低密度脂蛋膽固醇(low-density lipoprotein-cholesterol,LDL-C)、總膽固醇(total cholesterol,TC)、高密度脂蛋白膽固醇(high-density lipoprotein-cholesterol,HDL-C)及甘油三酯(triglycerides,TG)水平;用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血清血小板源生長(zhǎng)因子-BB(platelet derived growth factor-bb,PDGF-BB)和主動(dòng)脈勻漿基質(zhì)金屬蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、基質(zhì)金屬蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的表達(dá);免疫組織化學(xué)法觀察主動(dòng)脈弓血管平滑肌細(xì)胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)表型標(biāo)志物α-肌動(dòng)蛋白(α-actin)和骨橋蛋白(osteopontin,OPN)的表達(dá);將主動(dòng)脈蘇木素-伊紅(HE)染色,光鏡下觀察其病理改變。結(jié)果:1.大鼠一般狀況觀察及體質(zhì)量的改變:實(shí)驗(yàn)開(kāi)始,各組大鼠進(jìn)食、活動(dòng)情況、體質(zhì)量無(wú)明顯差異;造模后,第7周模型對(duì)照組有1只大鼠因厭食、體質(zhì)量下降死亡,其它各組均無(wú)死亡。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,正常對(duì)照組大鼠的進(jìn)食量較穩(wěn)定,體質(zhì)量一直呈增長(zhǎng)趨勢(shì);高脂飼料喂養(yǎng)2周后,模型對(duì)照組大鼠進(jìn)食量不同程度下降,體質(zhì)量明顯增長(zhǎng)緩慢,較正常對(duì)照組顯著下降(P0.01);水蛭微粉各治療組較模型對(duì)照組大鼠進(jìn)食量較多,體質(zhì)量增長(zhǎng)較快,第5周之前體質(zhì)量較模型對(duì)照組明顯增加(P0.05或P0.01),第5周之后水蛭微粉治療組較模型組大鼠體質(zhì)量有所增加(P0.05),但差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2.血清血脂水平的改變:模型對(duì)照組較正常對(duì)照組血清TC和LDL-C升高明顯(P0.01),TG有所降低(P0.05),HDL-C升高(P0.05),差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;與模型對(duì)照組比較,水蛭微粉各治療組TC和LDL-C明顯降低(P0.05或P0.01);水蛭微粉高劑量組較低劑量組TC和LDL-C有所降低(P0.05),差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;水蛭微粉高劑量組較模型對(duì)照組TG明顯升高(P0.05);水蛭微粉兩治療組較模型對(duì)照組HDL-C有降低趨勢(shì)(P0.05),但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3.血清PDGF-BB表達(dá)水平的變化:與正常對(duì)照組比較,模型對(duì)照組PDGF-BB的表達(dá)水平明顯升高(P0.01);水蛭微粉各治療組較模型對(duì)照組PDGF-BB的表達(dá)量降低明顯(P0.05或P0.01);水蛭微粉高劑量組較低劑量組PDGF-BB的表達(dá)水平有所降低(P0.05),但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。4.主動(dòng)脈勻漿MMP-2和MMP-9表達(dá)水平的變化:與正常對(duì)照組比較,模型對(duì)照組主動(dòng)脈MMP-2和MMP-9的表達(dá)水平均顯著升高(P0.01);與模型對(duì)照組相比,水蛭微粉各治療組MMP-2和MMP-9的表達(dá)水平均降低明顯(P0.05或P0.01);與水蛭微粉低劑量組比較,水蛭微粉高劑量組MMP-2和MMP-9的表達(dá)水平有降低趨勢(shì)(P0.05),但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。5.主動(dòng)脈弓血管平滑肌細(xì)胞表型標(biāo)志物α-actin表達(dá)的變化:正常對(duì)照組主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞α-actin陽(yáng)性染色均勻,模型對(duì)照組較正常對(duì)照組α-actin表達(dá)明顯下降(P0.05);各水蛭微粉治療組較模型對(duì)照組α-actin表達(dá)顯著升高(P0.05或P0.01);水蛭微粉高劑量組較低劑量組α-actin表達(dá)有所升高(P0.05),但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。6.主動(dòng)脈壁OPN表達(dá)的變化:正常對(duì)照組主動(dòng)脈壁OPN幾乎不表達(dá);模型對(duì)照組較正常對(duì)照組主動(dòng)脈壁OPN表達(dá)明顯增多(P0.01);各水蛭微粉治療組較模型對(duì)照組OPN表達(dá)顯著減少(P0.01);水蛭微粉高劑量組較低劑量組OPN表達(dá)明顯降低(P0.05)。7.血清PDGF-BB與主動(dòng)脈基質(zhì)金屬蛋白酶和平滑肌細(xì)胞表型標(biāo)志物相關(guān)性分析:血清PDGF-BB的表達(dá)水平與主動(dòng)脈MMP-2、MMP-9和OPN的表達(dá)水平呈正相關(guān)(P0.05),與SM-α-actin的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(P0.05)。8.主動(dòng)脈形態(tài)學(xué)變化:HE染色可見(jiàn),正常對(duì)照組大鼠主動(dòng)脈弓各層結(jié)構(gòu)均正常,內(nèi)膜完整、光滑,中膜平滑肌細(xì)胞排列整齊,彈力纖維排列規(guī)則;模型對(duì)照組主動(dòng)脈弓可見(jiàn)向腔內(nèi)凸起的斑塊,內(nèi)膜增厚,平滑肌細(xì)胞增生,斑塊內(nèi)發(fā)生變性壞死,并有泡沫細(xì)胞形成,膽固醇結(jié)晶沉積;水蛭微粉各治療組主動(dòng)脈病變較模型對(duì)照組均有不同程度減輕,水蛭微粉低劑量組主動(dòng)脈弓內(nèi)膜下可見(jiàn)少量斑塊形成,內(nèi)膜平滑肌細(xì)胞數(shù)量較少,斑塊內(nèi)可見(jiàn)少量的泡沫細(xì)胞及膽固醇結(jié)晶沉積;水蛭微粉高劑量組主動(dòng)脈弓中膜內(nèi)可見(jiàn)少量膽固醇結(jié)晶沉積,未見(jiàn)內(nèi)膜平滑肌細(xì)胞增殖,血管腔內(nèi)未見(jiàn)斑塊形成。結(jié)論:高脂飲食聯(lián)合兩次維生素D3注射液腹腔注射成功建立AS大鼠病理模型,符合脂質(zhì)斑塊形成、泡沫細(xì)胞形成、平滑肌細(xì)胞增生、膽固醇結(jié)晶沉積等AS病理改變;水蛭微粉防治AS形成的可能機(jī)制主要表現(xiàn)在:(1)水蛭微粉可減弱高負(fù)荷鈣吸收對(duì)大鼠消化系統(tǒng)和血管內(nèi)皮的損傷,改善大鼠體質(zhì)量和內(nèi)膜脂質(zhì)沉積,消弱AS的誘因;(2)水蛭微粉可顯著下調(diào)血清TC及LDL-C水平,減輕其對(duì)血管內(nèi)皮的損傷和內(nèi)膜脂質(zhì)沉積;(3)水蛭微粉可降低血清PDGF-BB的表達(dá),下調(diào)主動(dòng)脈MMP-2、MMP-9的表達(dá),抑制平滑肌細(xì)胞收縮表型標(biāo)志物α-actin表達(dá)的減少,下調(diào)主動(dòng)脈壁OPN的表達(dá),抑制基底膜及細(xì)胞外基質(zhì)的降解,減少脂質(zhì)向血管內(nèi)皮浸潤(rùn)和血管平滑肌細(xì)胞的遷移、表型轉(zhuǎn)化,能夠有效的干預(yù)AS的發(fā)生發(fā)展;(4)水蛭微粉對(duì)血管壁平滑肌細(xì)胞的表型轉(zhuǎn)化、遷移的抑制作用可能與降低血清PDGF-BB的表達(dá)有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：水蛭微粉 動(dòng)脈粥樣硬化 大鼠 血管平滑肌細(xì)胞 基質(zhì)金屬蛋白酶 血小板源生長(zhǎng)因子 表型轉(zhuǎn)化
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R543.5
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-13
• 縮略語(yǔ)/符號(hào)說(shuō)明13-14
• 前言14-17
• 研究現(xiàn)狀、成果14-16
• 研究目的、方法16-17
• 1.研究對(duì)象17-19
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和飼料17
• 1.2 實(shí)驗(yàn)藥物及試劑17-18
• 1.3 主要儀器18-19
• 2.研究方法19-26
• 2.1 動(dòng)物分組及模型建立19-20
• 2.2 標(biāo)本采集與保存20
• 2.3 血清及主動(dòng)脈勻漿指標(biāo)檢測(cè)20-22
• 2.4 石蠟切片的制備22-23
• 2.5 大鼠主動(dòng)脈免疫組織化學(xué)檢測(cè)23-25
• 2.6 主動(dòng)脈HE染色25
• 2.7 統(tǒng)計(jì)方法25-26
• 3.結(jié)果26-32
• 3.1 大鼠一般情況及體質(zhì)量的改變26
• 3.2 各組大鼠血脂水平的變化26-27
• 3.3 各組大鼠血清血小板源生長(zhǎng)因子-BB表達(dá)的變化27-28
• 3.4 各組大鼠主動(dòng)脈勻漿MMP-2 和MMP-9 表達(dá)水平的變化28
• 3.5 各組大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞 α-actin表達(dá)水平的免疫組織化學(xué)檢測(cè)28-29
• 3.6 各組大鼠主動(dòng)脈壁OPN表達(dá)水平的免疫組織化學(xué)檢測(cè)29-31
• 3.7 血清PDGF-BB與動(dòng)脈MMP-2、MMP-9 和平滑肌細(xì)胞表型標(biāo)志物相關(guān)性分析31
• 3.8 各組大鼠主動(dòng)脈弓病理改變31-32
• 4.討論32-47
• 4.1 現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究及傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)理論對(duì)AS的認(rèn)識(shí)32-34
• 4.2 動(dòng)脈粥樣硬化大鼠病理模型的建立34-35
• 4.3 水蛭微粉對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化大鼠血脂水平的影響35-37
• 4.4 水蛭微粉對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化大鼠血清血小板源生長(zhǎng)因子-BB的影響37-38
• 4.5 水蛭微粉對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化大鼠主動(dòng)脈MMP-2和MMP-9表達(dá)水平的影響38-40
• 4.6 水蛭微粉對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞表型標(biāo)志物α-肌動(dòng)蛋白表達(dá)水平的影響40-43
• 4.7 水蛭微粉對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化大鼠主動(dòng)脈壁OPN表達(dá)的影響43-44
• 4.8 PDGF-BB與血管平滑肌細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化、遷移和增殖的關(guān)系44-45
• 4.9 小結(jié)45-47
• 結(jié)論47-48
• 參考文獻(xiàn)48-56
• 發(fā)表論文和參加科研情況說(shuō)明56-57
• 綜述 動(dòng)脈粥樣硬化中血管平滑肌細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化機(jī)制的研究進(jìn)展57-73
• 綜述參考文獻(xiàn)65-73
• 致謝73-75
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷75

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1 潘賀;剛宏林;王志國(guó);;水蛭素及重組水蛭素的應(yīng)用研究概況[J];中醫(yī)藥學(xué)報(bào);2006年02期

2 矯建;姜素云;湯新強(qiáng);張婷婷;;水蛭素及重組水蛭素體內(nèi)外分析方法的研究進(jìn)展[J];中國(guó)新藥雜志;2011年01期

3 鄭巧燕;;水蛭素及重組水蛭素的研究概況[J];海峽藥學(xué);2013年08期

4 Fink E;嘉禾書(shū);;水蛭素的比較[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).輸血及血液學(xué)分冊(cè);1990年04期

5 李有觀;;工業(yè)法生產(chǎn)水蛭素[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)情報(bào);1990年04期

6 武曉玲,陳漢華;水蛭的研究及臨床應(yīng)用[J];醫(yī)學(xué)綜述;1995年06期

7 耿稚江;;生物技術(shù)藥——水蛭素[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)情報(bào);1998年02期

8 王鴻利,王立志;水蛭素的基礎(chǔ)與臨床[J];上海醫(yī)學(xué);1999年11期

9 Sophie;;水蛭:無(wú)痕手術(shù)刀[J];科海故事博覽(智慧文摘);2008年02期

10 韓正雪;現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)水蛭功效認(rèn)識(shí)的概況[J];黑龍江中醫(yī)藥;2000年06期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 矯建;姜素云;張婷婷;湯新強(qiáng);;水蛭素分析方法的研究現(xiàn)狀[A];第九屆全國(guó)藥物和化學(xué)異物代謝學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2009年

2 黃一農(nóng);莫煒;于敏;;新型重組雙功能水蛭素與凝血酶相互作用關(guān)系研究[A];第七屆全國(guó)醫(yī)學(xué)生物化學(xué)與分子生物學(xué)和第四屆全國(guó)臨床應(yīng)用生物化學(xué)與分子生物學(xué)聯(lián)合學(xué)術(shù)研討會(huì)暨醫(yī)學(xué)生化分會(huì)會(huì)員代表大會(huì)論文集[C];2011年

3 宋霞;劉新剛;莫煒;嚴(yán)小敏;戴林森;;新型重組雙功能水蛭素溶液結(jié)構(gòu)的研究[A];第十四屆全國(guó)波譜學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C];2006年

4 孫國(guó)權(quán);鐘明哲;;水蛭以生用為宜[A];'99全國(guó)中藥研究暨中藥房管理學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];1999年

5 李開(kāi)龍;何婭妮;任姜汶;霍本剛;張瑩;李開(kāi)斌;楊杰;;水蛭素保護(hù)自體動(dòng)靜脈內(nèi)瘺的臨床觀察[A];第十一屆全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合腎臟病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2010年

6 金富銳;王秀霞;;水蛭治療輸卵管不孕附2例臨床報(bào)道[A];首屆全國(guó)生殖醫(yī)學(xué)論壇暨生殖相關(guān)疾病診療技術(shù)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2007年

7 危成筠;;水蛭及水蛭素在腎臟病中的中西醫(yī)研究進(jìn)展[A];第六屆全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合腎臟病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2000年

8 郝艷麗;韓偉;張小寧;;水蛭素的給藥途徑及其相關(guān)劑型研究進(jìn)展[A];2006第六屆中國(guó)藥學(xué)會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2006年

9 歐興長(zhǎng);張秋海;丁家欣;劉振麗;張玲;楊潼;;四種水蛭抗凝血酶作用的研究[A];中國(guó)中醫(yī)研究院基礎(chǔ)理論研究所學(xué)術(shù)論文匯編[C];1997年

10 宋劍濤;;水蛭素對(duì)實(shí)驗(yàn)性增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變Ki-67表達(dá)的影響[A];2002中醫(yī)藥博士論壇——中醫(yī)藥的繼承、創(chuàng)新與發(fā)展[C];2002年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 程軍;人工養(yǎng)殖水蛭[N];中國(guó)海洋報(bào);2001年

2 丁立威 丁鄉(xiāng);水蛭的采收與加工[N];福建科技報(bào);2004年

3 常山;水蛭市場(chǎng)看好[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2001年

4 本報(bào)記者　 嵇哲 通訊員　 盛楚江;水蛭身上掙大錢(qián)[N];浙江日?qǐng)?bào);2006年

5 王宇懷;水蛭的生長(zhǎng)及特點(diǎn)[N];中國(guó)特產(chǎn)報(bào);2000年

6 丁立威 丁鄉(xiāng);水蛭的采收與加工技術(shù)[N];中國(guó)特產(chǎn)報(bào);2004年

7 李德智;水蛭的采收與加工[N];中國(guó)漁業(yè)報(bào);2005年

8 丁鄉(xiāng);水蛭市場(chǎng)持續(xù)走強(qiáng)[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2001年

9 丁鄉(xiāng);水蛭價(jià)格連年走高[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2001年

10 朱宏元 常泰;藥用養(yǎng)殖品種——水蛭[N];廣東科技報(bào);2001年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前9條

1 彭鎏;水蛭素通過(guò)p38 MAPK/IKK/NF-κB通路調(diào)節(jié)大鼠血運(yùn)障礙皮瓣炎癥反應(yīng)及細(xì)胞凋亡相關(guān)因子表達(dá)的研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2016年

2 潘新元;水蛭素調(diào)節(jié)MAPKs通路促進(jìn)大鼠缺血皮瓣血管生成及抗血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2016年

3 王敏;水蛭素抑制血管平滑肌細(xì)胞增殖和內(nèi)皮細(xì)胞損傷及其機(jī)理的研究[D];山東大學(xué);2004年

4 于愛(ài)平;溶栓抗凝雙功能融合蛋白的構(gòu)建表達(dá)和功能研究及PEG修飾的水蛭素緩釋劑型的研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2005年

5 張宇杲;葡激酶模擬肽的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2004年

6 唐瑜菁;凝血酶激活的纖溶抑制劑與水蛭素對(duì)纖溶的影響[D];江南大學(xué);2005年

7 吳秋玲;水蛭、斑蝥對(duì)腫瘤血管生成及VEGF、MMP表達(dá)的影響[D];湖北中醫(yī)藥大學(xué);2011年

8 石s，

本文編號(hào)：300038