目的：分離培養(yǎng)原代乳鼠心肌細(xì)胞并誘導(dǎo)其肥大,以肥大的心肌細(xì)胞模擬建立缺血后適應(yīng)模型,在此基礎(chǔ)上添加藥物干預(yù)檢測(cè)S1P/S1P1信號(hào)通路在肥大心肌細(xì)胞缺血后適應(yīng)中的作用。方法：分離培養(yǎng)原代乳鼠心肌細(xì)胞,并通過(guò)免疫熒光法對(duì)其純度進(jìn)行鑒定。用去甲腎上腺素（NE）誘導(dǎo)心肌細(xì)胞肥大,通過(guò)RT-PCR檢測(cè)β-MHC和測(cè)量細(xì)胞表面積來(lái)驗(yàn)證心肌細(xì)胞肥大情況并確定NE最佳濃度。用三氣培養(yǎng)箱缺氧、復(fù)氧模擬建立細(xì)胞缺血再灌注模型及缺血后適應(yīng)模型,通過(guò)TUNEL法檢測(cè)細(xì)胞形態(tài)學(xué)凋亡和AnnexinV-FITC/PI雙染法檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡率來(lái)確定模型的建立情況并以RT-PCR檢測(cè)相關(guān)mRNA （S1P1）的表達(dá)。肥大心肌細(xì)胞在缺氧后適應(yīng)基礎(chǔ)上添加藥物干預(yù)信號(hào)通路進(jìn)行相關(guān)檢測(cè),根據(jù)添加藥物分為5組：（1）空白組,（2）S1P組,（3）W-146+S1P組,（4） PD98059+S1P組,（5） LY-294002+S1P組。通過(guò)流式檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡率、TUNEL法檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡形態(tài)、Western-blot檢測(cè)凋亡蛋白及相關(guān)信號(hào)通路蛋白（t-ERK1/2、p-ERK1/2、t-Ak、p-Akt）表達(dá)。結(jié)果：（... 

【文章來(lái)源】：新疆醫(yī)科大學(xué)新疆維吾爾自治區(qū)

【文章頁(yè)數(shù)】：58 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

h后心肌細(xì)胞形態(tài)(分別為x100,x200,x400倍)

而化組和ＩＰｏｓｔ組肥大必肌細(xì)胞中陽(yáng)性著色細(xì)胞核呈綠色顆粒，細(xì)胞體??積縮小，有致密的染色質(zhì)邊集、斷裂成核碎片等改變，且ＩＰｏｓｔ組肥大必肌細(xì)胞ＴＵＮＥＬ??染色陽(yáng)性細(xì)胞要明顯少于化組（圖９）。流式細(xì)胞儀檢測(cè)發(fā)現(xiàn)化組（２７．９０％±４．４９％）??和ＩＰｏｓｔ組肥大也肌細(xì)胞（１５．９０〇／〇±１．７７％）的調(diào)亡率明顯高于Ｓｈａｍ姐肥大也肌細(xì)胞??（７．９７％±２．１８％），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ｆ＜０．０５），而ＩＰｏｓｔ組洞亡率要明顯低于化??組（戶＜０．０５）。綜合Ｗ上結(jié)果證明，缺氧后適應(yīng)模型建立成功（圖１０，１１）。??■?■■■??Ｓｈａｍ?ＩＲ?ＩＰｏｓｔ??圖９?ＴＵＮ：ＥＬ染色鏡下各絕贓大也肌綿胞調(diào)ｔ：情況??Ｆｉｇ．９?Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ?ｏｆ?ｅａｃｈ?ｇｒｏｕｐ?ｄｅｔｅｃｔｅｄ?ｂｙ?ＴＵＮＥＬ?ｓｔａｉｎ??２２??

結(jié)果??１原代郭鼠也肌細(xì)胞的分離培養(yǎng)及鑒定??１．１也肌細(xì)胞存活率??臺(tái)盼藍(lán)染色后計(jì)數(shù)，共乂６個(gè)必肌細(xì)胞，１２個(gè)細(xì)胞染色陽(yáng)性呈藍(lán)色，其余未染??色，也肌細(xì)胞細(xì)胞存活率較高，為９７％左右。??１．２也肌細(xì)胞形態(tài)及搏動(dòng)情況??倒置顯微鏡下可見(jiàn)剛分離出的也肌細(xì)胞呈圓形，大而透亮，懸浮于培養(yǎng)液中。４??ｈ后細(xì)胞開(kāi)始貼壁生長(zhǎng)，１２?ｈ后細(xì)胞基本貼壁，開(kāi)始變形，伸展為梭形、棒狀、星??狀、Ｈ角形和多邊形等形態(tài)，并且細(xì)胞核大且胞漿豐富，立體感明顯，折光性強(qiáng)。??２４?ｈ后貼壁的單個(gè)也肌細(xì)胞開(kāi)始出現(xiàn)自發(fā)性的搏動(dòng)，細(xì)胞間搏動(dòng)頻率各有不同（圖??１）。４化后也肌細(xì)胞伸出偽足，相互之間開(kāi)始形成交聯(lián)，細(xì)胞交聯(lián)后搏動(dòng)的頻率同??步且明顯加快（圖２）。７化后必肌細(xì)胞開(kāi)始聚集成簇，有菊形的細(xì)胞團(tuán)形成，細(xì)胞??簇呈島碼樣搏動(dòng)（圖３）。此方法分離培養(yǎng)的必肌細(xì)胞培養(yǎng)到第４、５ｄ細(xì)胞搏動(dòng)率可??法到９〇％Ｗ上，說(shuō)明也肌細(xì)胞的純度高。??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]9型腺相關(guān)病毒介導(dǎo)CaMEK基因轉(zhuǎn)染增強(qiáng)心肌細(xì)胞ERK1/2通路表達(dá)活性的研究[D]. 紀(jì)偉寧.新疆醫(yī)科大學(xué) 2012



本文編號(hào)：2993652