血管內(nèi)皮功能紊亂是多種心血管疾病致病機制的起始及核心環(huán)節(jié),是急性心肌梗死,動脈粥樣硬化等心血管疾病的致病基礎(chǔ)。研究表明,糖尿病、動脈粥樣硬化、心肌缺血等心血管疾病的患者循環(huán)血液中MVs水平上升,這些MVs中包含內(nèi)皮細胞在受到刺激或凋亡時所釋放的EMVs。EMVs并非簡單的生物學(xué)標志物,它們同時在血管內(nèi)皮功能紊亂的致病機制中發(fā)揮著重要作用。不同病理狀態(tài)下產(chǎn)生的EMVs具有不同的生物學(xué)功能。I/R作為多種心血管疾病的病理生理基礎(chǔ),可引起血管內(nèi)皮功能紊亂及凋亡壞死。但有關(guān)H/R誘導(dǎo)產(chǎn)生的H/R-EMVs是否在血管內(nèi)皮功能紊亂中發(fā)揮作用以及H/R-EMVs是否可以削弱離體大鼠胸主動脈環(huán)的內(nèi)皮依賴性舒張反應(yīng)尚不清晰。因此,本實驗擬通過H/R誘導(dǎo)HUVECs產(chǎn)生EMVs,探討H/R-EMVs對離體大鼠胸主動脈環(huán)舒張功能的影響。目的:研究H/R-EMVs對離體大鼠胸主動脈環(huán)舒張功能的影響及其相關(guān)機制。方法:1.H/R誘導(dǎo)HUVECs損傷模型的建立用含10%FBS的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)HUVECs 24 h達到融合70-80%后,棄去培養(yǎng)上清液,換用缺氧液。將HUVECs放置于缺氧裝置中,使用95%N2... 

【文章來源】：天津醫(yī)科大學(xué)天津市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：91 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
縮略語
前言
    研究現(xiàn)狀及成果
    研究目的、方法
一、H/R-EMVs的分離提取及鑒定
    1.1 實驗材料
        1.1.1 細胞
        1.1.2 實驗儀器
        1.1.3 實驗耗材與器材
        1.1.4 藥品與試劑
    1.2 實驗方法
        1.2.1 主要溶液的配制
        1.2.2 HUVECs的復(fù)蘇、傳代與凍存
        1.2.3 MTT法檢缺氧 12 h復(fù)氧 4 h HUVECs的存活率
        1.2.4 H/R方法誘導(dǎo)HUVECs釋放MVs
        1.2.5 H/R-EMVs的流式鑒定和計數(shù)
        1.2.6 H/R-EMVs的蛋白定量（BCA法）
        1.2.7 數(shù)據(jù)處理
    1.3 結(jié)果
        1.3.1 H/R誘導(dǎo)HUVECs損傷模型的建立
        1.3.2 H/R-EMVs的流式鑒定和計數(shù)結(jié)果
        1.3.3 H/R-EMVs的蛋白定量
    1.4 小結(jié)
二、H/R-EMVs對離體大鼠胸主動脈環(huán)舒張功能的影響及相關(guān)機制的研究
    2.1 實驗材料
        2.1.1 實驗動物
        2.1.2 實驗儀器
        2.1.3 實驗耗材與器械
        2.1.4 藥品與試劑
    2.2 實驗方法
        2.2.1 主要溶液的配制
        2.2.2 H/R-EMVs處理離體大鼠胸主動脈環(huán)
        2.2.3 離體大鼠胸主動脈環(huán)實驗
        2.2.4 離體大鼠胸主動脈環(huán)的凍存及組織勻漿
        2.2.5 離體大鼠胸主動脈環(huán)NO的測定
        2.2.6 離體大鼠胸主動脈環(huán)p-eNOS/t-eNOS的測定
        2.2.7 離體大鼠胸主動脈環(huán)SOD, MDA的測定
        2.2.8 數(shù)據(jù)處理
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 H/R-EMVs對ACh、SNP介導(dǎo)的離體大鼠胸主動脈環(huán)舒張功能的影響
        2.3.2 H/R-EMVs對NO含量的影響
        2.3.3 H/R-EMVs對離體大鼠胸主動脈環(huán)中p-eNOS/t-eNOS含量的影響
        2.3.4 H/R-EMVs對離體大鼠胸主動脈環(huán)中SOD, MDA含量的影響
    2.4 小結(jié)
討論
    1 MVs的生物學(xué)作用
    2 H/R-EMVs的分離及鑒定
        2.1 H/R-EMVs的分離及提取
        2.2 H/R-EMVs的流式檢測及表型鑒定
    3 H/R-EMVs對離體大鼠胸主動脈環(huán)舒張率的影響
    4 H/R-EMVs對離體大鼠胸主動脈環(huán)NO含量的影響
    5 H/R-EMVs對離體大鼠胸主動脈環(huán)中p-eNOS/t-eNOS的影響
    6 H/R-EMVs對離體大鼠胸主動脈環(huán)中SOD活性及MDA含量的影響
    7 總結(jié)與展望
結(jié)論
參考文獻
發(fā)表論文和參加科研情況說明
綜述
    參考文獻
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]人骨髓間充質(zhì)干細胞釋放膜微囊條件探索[J]. 畢曉云,黃舒,陳晶礪,王芳,王燕,郭子寬.  中國實驗血液學(xué)雜志. 2014(02)
[2]Effects of endothelial microvesicles induced by A23187 on H9c2 cardiomyocytes[J]. Man SHANG,Qi ZHANG,Meng-xiao ZHANG,Yao WANG,Yan CHEN,Yan-na WU,Jun-qiu SONG,Ming-lin LIU,Yan-xia LIU.  中國應(yīng)用生理學(xué)雜志. 2013(06)
[3]飲食誘導(dǎo)糖調(diào)節(jié)受損大鼠睪丸細胞抗氧化水平、細胞周期進程和凋亡的變化[J]. 方芳,張桂英,高田林,肖宛凝,劉宇欣,劉婭,王志成.  中華男科學(xué)雜志. 2013(05)



本文編號：2985638