發(fā)布時間：2021-01-17 09:24

　　目的探討FGF-2拮抗氧化應(yīng)激引起的H9c2心肌細胞凋亡的新機制。方法1.采用體外培養(yǎng)的H9c2心肌細胞，用不同濃度（0，50，100，200，400μmol/L）的H2O2處理6h，用MTT法篩選出H2O2引起細胞凋亡的最適濃度；用不同濃度（0，2.5，5，10，20ng/ml）的FGF-2與培養(yǎng)的H9c2心肌細胞共同孵育0.5h，再用H2O2刺激6h后，用MTT法篩選FGF-2拮抗H2O2引起的細胞凋亡的最適濃度；2.100μmol/L H2O2處理H9c2心肌細胞不同時間后，Western blot檢測細胞內(nèi)Akt, p-Akt, FoxO3a, p-FoxO3a和Bim蛋白的表達變化。3.進一步實驗分組：（l）對照組：以不含F(xiàn)GF-2的DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)H9c2心肌細胞45min；（2） H2O2組：培養(yǎng)液中加入終濃度為100μmol/L H2O2刺激45min；（3） FGF-2+H2O2組：以含10ng/ml FGF-2的DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)細胞30min后，100μmol/LH2O2刺激45min；（4） FGF-2+H2O2+LY294002（PI3K/Akt信號通路抑制... 

【文章來源】：南華大學湖南省

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

FGF-2減輕H2O2對H9c2心肌細胞活力的抑制作用Fig1.ProtectiveeffectsofFGF-2onHO-inducedH9c2cardiomyocytesinjury.(A)H9c2

LY294002 逆轉(zhuǎn) FGF-2 對 H2O2損傷心肌細胞活性的抑t with LY294002 antagonized the protective effecinjury(MTT assay). *P < 0.05, compared with cont2group;﹠P < 0.05, compared with H2O2+FGF-2 group.（O2誘導(dǎo)的 H9c2 心肌細胞凋亡的影響-2 是否能拮抗 H2O2誘導(dǎo)的 H9c2 心肌細胞凋亡100μmol/L）組；FGF-2+H2O2（10ng/ml FGF-2H2O2+LY294002 （ 10ng/mlFGF-2+100μmo分別處理 6h 后收集細胞。首先采用 Hoechst核形態(tài)變化(圖 3A)。Hoechst 染色后，正常細胞橢圓形，清晰完整，體積較大，熒光染色呈勻染，固縮，熒光染色呈高亮，或呈碎塊狀致密濃，H2O2處理組與對照組相比，凋亡細胞數(shù)量明

FGF-2+H2O2組相比，呈綠色熒光的凋亡細胞明顯增多。進一步采用PI流式細胞術(shù)定量分析各組細胞的凋亡情況。如圖3C所示，H2O組細胞凋亡率為 27.24%，F(xiàn)GF-2 預(yù)孵育后，細胞凋亡率可降至 6.21%(P<0.01)；FGF-2+H2O2+LY294002 組 與 FGF-2+H2O2組 相 比 ， 細 胞 的 凋 亡 率 升 高 至17.89%(P<0.05)。此結(jié)果與 Hoechst 染色和 TUNEL 染色的結(jié)果基本一致。這些數(shù)據(jù)表明，F(xiàn)GF-2 可以拮抗 H2O2所誘導(dǎo)的心肌細胞凋亡，并且其拮抗作用與PI3K/Akt 信號通路有關(guān)。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Improved myocardial perfusion and cardiac function by controlled-release basic fibroblast growth factor using fibrin glue in a canine infarct model[J]. Shao-ping NIE1,Xiao WANG1,Shi-bin QIAO1,Qiu-tang ZENG2,Ju-quan JIANG2,Xiao-qing LIU2,Xiang-ming ZHU2,Guo-xiang CAO2,Chang-sheng MA1 (1Department of Cardiology,Beijing Anzhen Hospital,Capital Medical University,Beijing 100029,China) (2Union Hospital of Tongji Medical College,Huazhong University of Science and Technology,Wuhan 430030,China).  Journal of Zhejiang University-Science B（Biomedicine & Biotechnology）. 2010(12)



本文編號：2982604