研究背景:在嚴(yán)重?zé)齻�、�?chuàng)傷出血性休克、高原急性缺氧或其他缺氧疾病中,心臟都是損傷的重要靶器官。作為機(jī)體的循環(huán)動力器官,心肌缺氧損傷會進(jìn)一步誘發(fā)機(jī)體供氧減少,加重全身其他組織和器官的損傷。因此,探討缺氧下心肌細(xì)胞的損傷機(jī)制對缺氧性心血管疾病的防治具有重要的臨床意義。自噬（Autophagy）是廣泛存在于真核細(xì)胞中進(jìn)化保守的一種防御與應(yīng)激調(diào)控機(jī)制。自噬通過降解長壽命與老化/受損蛋白質(zhì)促進(jìn)細(xì)胞器的更新和維持細(xì)胞穩(wěn)態(tài),參與了機(jī)體生長發(fā)育及各種疾病發(fā)生發(fā)展過程。自噬是一個動態(tài)的過程,具體來說包括誘導(dǎo)、囊泡的核化、自噬體成熟、自噬體與溶酶體融合、底物降解與營養(yǎng)再循環(huán),上述步驟的動態(tài)過程稱為自噬流（Autophagy flux）,大量的研究表明細(xì)胞自噬與心肌缺氧、心肌感染、心力衰竭等多種心血管疾病密切相關(guān),在缺氧狀態(tài)心肌細(xì)胞中,細(xì)胞自噬體與溶酶體融合受阻,自噬流受損,導(dǎo)致自噬體蓄積,喪失清除受損細(xì)胞器的功能,進(jìn)而加重氧化應(yīng)激損傷,ROS聚集,線粒體通透性增加,最終導(dǎo)致細(xì)胞死亡。但其確切機(jī)制尚不明確。許多信號通路和細(xì)胞因子參與細(xì)胞自噬,瞬時受體電位香草酸亞型1（TRPV1）是一種廣泛分布于細(xì)胞膜和細(xì)胞... 

【文章來源】：中國人民解放軍陸軍軍醫(yī)大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

不同缺氧時間心肌細(xì)胞自噬標(biāo)志蛋白的表達(dá)

圖 2.1 不同缺氧時間心肌細(xì)胞自噬標(biāo)志蛋白的表達(dá)對心肌細(xì)胞活力的影響。的 C57BL/6 乳鼠心肌細(xì)胞分為常氧組、常氧+氯喹組、 CCK8 法和 LDH 法檢測了各組心肌細(xì)胞活力。在 CC組心肌細(xì)胞活力下降（p＜0.05），常氧組+氯喹組中細(xì)缺氧+氯喹組中細(xì)胞活力較單純?nèi)毖踅M中明顯下降。（圖氧組相比，缺氧組及常氧組+氯喹組心肌細(xì)胞活力明顯下缺氧+氯喹組心肌細(xì)胞活力明顯下降（p＜0.05）（圖 2組， #＜0.05 vs. 缺氧組）

（7）封片：取出爬片放于 24 孔板中，PBS 漂洗 3 次，每次 5min。載玻片上滴加5μL 抗熒光淬滅液，爬片吸干殘液后倒扣于載玻片上，避免產(chǎn)生氣泡。（8）觀察：制好的爬片使用激光共聚焦掃描顯微鏡觀察并保存圖片。3.1.8 統(tǒng)計學(xué)分析 同 2.1.113.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果3.2.1 缺氧心肌細(xì)胞中 TRPV1 通道蛋白的表達(dá)情況。通過 WB 法檢測發(fā)現(xiàn)，在缺氧 3h 組、缺氧 6h 組、缺氧 9h 組中 TRPV1 蛋白的表達(dá)較常氧組中表達(dá)明顯增高（p＜0.05）（圖 3.1 A、C），其中在缺氧 6h 組中 TRPV蛋白的表達(dá)達(dá)到峰值。其次，進(jìn)一步用 IF 法檢測了常氧組和缺氧組中 TRPV1 的表達(dá)情況，結(jié)果顯示缺氧組 TRPV1 通道蛋白在心肌細(xì)胞膜和胞內(nèi)密度明顯增加，呈團(tuán)塊狀分布，表達(dá)明顯強(qiáng)于常氧組（圖 3.1 B）。（n=3，*p＜0.05 vs. 常氧組）

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]辣椒素對大鼠心肌缺血再灌注損傷保護(hù)作用的研究[J]. 秦素蘭,劉陜嶺,王儒蓉.  四川大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版). 2008(04)



本文編號：2938274