發(fā)布時間：2020-12-24 13:58

　　目的用Islet-1慢病毒表達(dá)載體轉(zhuǎn)染C3H10T1/2細(xì)胞,使其高表達(dá)Islet-1,特異性誘導(dǎo)C3H10T1/2細(xì)胞分化為心肌樣細(xì)胞,通過檢測誘導(dǎo)后各組細(xì)胞鈉鉀鈣離子通道編碼基因以及細(xì)胞膜離子通道電流的表達(dá)情況,分析明確Islet-1可誘導(dǎo)C3H10T1/2分化為具有電生理功能的心肌樣細(xì)胞。方法復(fù)蘇并傳代培養(yǎng)C3H10T1/2細(xì)胞,將生長狀態(tài)良好的細(xì)胞按1×104/孔接種于24孔板內(nèi),待細(xì)胞融合至70%時加入慢病毒表達(dá)載體轉(zhuǎn)染C3H10T1/2細(xì)胞,熒光顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染慢病毒后細(xì)胞綠色熒光蛋白表達(dá)以及細(xì)胞形態(tài)變化,流式細(xì)胞術(shù)檢測慢病毒轉(zhuǎn)染效率,并用western blot檢測轉(zhuǎn)染慢病毒后Islet-1表達(dá)情況；差速貼壁法分離培養(yǎng)新生小鼠心肌細(xì)胞,細(xì)胞免疫熒光法鑒定心肌細(xì)胞純度；實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）檢測細(xì)胞鈉鉀鈣離子通道編碼基因表達(dá)水平,并采用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)檢測細(xì)胞膜鈉鉀鈣離子通道電流的表達(dá),與空白對照組（未處理的C3H10T1/2細(xì)胞）,陰性對照組（轉(zhuǎn)染空慢病毒載體組）,以及陽性對照組（新生小鼠心肌細(xì)胞）進(jìn)行比較。結(jié)果1.轉(zhuǎn)染慢病毒后96h,熒光顯微鏡可見細(xì)胞己... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２．１．２巧病毒惠染效牟??Ａ：?Ｎｅｇａｔｉｖｅ?ｇｒｏｕｐ；?Ｂ：?Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ?ｇｒｏｕｐ??

２．５細(xì)艙免疫巧光法鑒定私肌細(xì)胞??細(xì)胞免疫巧光檢測ｃＴｎＴ和ＣＸ４３蛋白對屯、肌細(xì)胞進(jìn)行鑒定，ｃＴｎＴ陽性的細(xì)??胞呈強紅色英光（圖２．５?Ａ），ＣＸ４３陽性細(xì)胞呈強綠色英光（圖２．５?Ｂ）�？梢姡梗埃�??Ｗ上細(xì)胞可表達(dá)ｃＴｎＴ和ＣＸ４３，純度較高。??２２??

圖２．５新生小魚

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：2935773