發(fā)布時(shí)間：2020-12-21 23:05

　　目的:探討CaN/NFAT3信號(hào)通路是否介導(dǎo)線粒體乙醛脫氫酶2對(duì)糖尿病大鼠心肌損傷保護(hù)作用及可能分子機(jī)制方法:無(wú)菌條件下取出生3天內(nèi)SD大鼠乳鼠心臟,心尖部剪碎并用胰蛋白酶和膠原酶Ⅱ混合酶消化成單個(gè)細(xì)胞,經(jīng)差速貼壁后并在培養(yǎng)液中加入5-Brdu進(jìn)行原代培養(yǎng),當(dāng)其生長(zhǎng)呈融合狀態(tài)時(shí)對(duì)心室肌細(xì)胞進(jìn)行處理。應(yīng)用免疫熒光檢測(cè)培養(yǎng)的乳鼠心肌細(xì)胞內(nèi)α-SA蛋白以此鑒定原代培養(yǎng)心室肌細(xì)胞純度;實(shí)驗(yàn)涉及如下分組:5.5mmol/L糖對(duì)照組（M）、30mmol/L高糖組（MH）、30mmol/L高糖加乙醛脫氫酶2激動(dòng)劑（Alda-1）組（MHA）、30mmol/L高糖加乙醛脫氫酶2抑制劑（Daidzin）組（MHD）、30mmol/L高糖加乙醛脫氫酶2激動(dòng)劑（Alda-1）和抑制劑（Daidzin）組（MHAD）、30mmol/L高糖加乙醛脫氫酶2激動(dòng)劑（Alda-1）和NFAT3抑制劑（11R-VIVIT）組（MHAV）;CCK8試劑盒測(cè)量NFAT3抑制劑最佳使用濃度;熒光探針檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度;ELISA測(cè)定細(xì)胞內(nèi)CaN含量;免疫熒光檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)CaNAβ含量;Western blot檢測(cè)ALDH2、... 

【文章來(lái)源】：蚌埠醫(yī)學(xué)院安徽省

【文章頁(yè)數(shù)】：64 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

不同倍數(shù)下光鏡觀察原代培養(yǎng)心肌細(xì)胞

2 原代心肌細(xì)胞免疫熒光鑒定結(jié)果通過(guò)重復(fù)差速貼壁結(jié)合 5-Brdu 得到純度較高的心肌細(xì)胞，并且通過(guò)對(duì)特異性達(dá)于心肌細(xì)胞和骨骼肌細(xì)胞中α-橫紋肌肌動(dòng)蛋白進(jìn)行免疫熒光染色后，心肌-SA 抗原免疫熒光呈陽(yáng)性反應(yīng)，為綠色，位于細(xì)胞漿內(nèi)，DAPI 細(xì)胞核染色為藍(lán)，Merged 為α-SA 和 DAPI 合成結(jié)果，圖 3。

圖 3.心肌細(xì)胞免疫熒光鑒定（x100)Fig.3. Immunefluorescence identification of cardiomyocytes(x100).T3 抑制劑最佳使用濃度 NFAT3 特異性抑制劑 11R-VIVIT 后發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞活性增強(qiáng)，且在依賴性；當(dāng)抑制劑濃度達(dá)到 2um/L 時(shí)細(xì)胞活性達(dá)到最大值；再濃度隨之出現(xiàn)細(xì)胞活性下降趨勢(shì)；與 MH 組相比，MH+0 組、MH+2umol/L 11RVIVIT 組心肌細(xì)胞活性顯著升高，見圖 4

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]高糖激活Ca2+-CaN-NFAT3信號(hào)通路致H9c2細(xì)胞肥大[J]. 徐小紅,阮駱陽(yáng),田小華,潘鳳娟,楊彩蘭,柳國(guó)勝.  中國(guó)病理生理雜志. 2015(11)
[2]線粒體乙醛脫氫酶2在心肌缺血后處理中的作用[J]. 高琴,姜翠榮,于影,胡杰,李正紅,關(guān)宿東.  中國(guó)藥理學(xué)通報(bào). 2010(08)
[3]釩酸鹽糾正了糖尿病大鼠心肌組織內(nèi)活化的DAG-PKC信息傳導(dǎo)[J]. 梁自文,張忠輝,羅南渝,張平.  中國(guó)糖尿病雜志. 1999(04)



本文編號(hào)：2930671