目的轉(zhuǎn)鐵蛋白受體（Transferrin Receptor,TfR,CD71）介導(dǎo)細(xì)胞對(duì)鐵的吸收,對(duì)細(xì)胞增殖具有重要意義。生理情況下,TfR在細(xì)胞表面低表達(dá),而腫瘤細(xì)胞鐵代謝發(fā)生改變,對(duì)鐵的攝入增加,故TfR表達(dá)水平大幅上調(diào)。本研究旨在構(gòu)建并生產(chǎn)出靶向TfR的雙特異性抗體,并通過(guò)體外細(xì)胞系實(shí)驗(yàn)與臨床樣本實(shí)驗(yàn),驗(yàn)證其活化T細(xì)胞并靶向殺傷腫瘤細(xì)胞的作用,為TfR作為腫瘤治療靶點(diǎn)奠定基礎(chǔ)。方法1.構(gòu)建表達(dá)載體Single-TfR-CD3-His并轉(zhuǎn)染DG44細(xì)胞,挑選出蛋白表達(dá)量較高的細(xì)胞株大規(guī)模培養(yǎng),用鎳離子親和層析法純化出目的抗體并鑒定。2.體外細(xì)胞系實(shí)驗(yàn)流式檢測(cè)TfR-BiTE介導(dǎo)T細(xì)胞對(duì)多種不同細(xì)胞來(lái)源的血液腫瘤細(xì)胞的殺傷情況。3.收集臨床白血病患者血樣,并檢測(cè)腫瘤細(xì)胞TfR表達(dá)水平,流式檢測(cè)TfR-BiTE介導(dǎo)T細(xì)胞對(duì)原代白血病細(xì)胞的殺傷效果。結(jié)果1.純化出TfR-BiTE共約0.8ml,濃度為2.17mg/ml,抗體分子量約55kDa。2.血液腫瘤均高表達(dá)TfR,TfR-BiTE介導(dǎo)T細(xì)胞對(duì)血液各腫瘤細(xì)胞系均有不錯(cuò)的殺傷效果:對(duì)AML細(xì)胞系KG-1a最大殺傷率達(dá)到約40%,對(duì)淋巴... 

【文章來(lái)源】：華中科技大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

TfR一Bi下〔分別與相應(yīng)靶點(diǎn)結(jié)合

分析上圖發(fā)現(xiàn)：TfR-BiTE 可以介導(dǎo) PBMCs 對(duì)多種血液腫瘤細(xì)胞發(fā)揮殺傷作，殺傷效果與 TfR-BiTE 濃度成正比，濃度低至 1ng/ml 時(shí)即可觀察到殺傷效果。 步分析發(fā)現(xiàn)，不同細(xì)胞來(lái)源的腫瘤細(xì)胞對(duì) TfR-BiTE 介導(dǎo)的 PBMCs 殺傷效應(yīng)敏感性不同，KG-1a 的最大死亡率為 40%左右，而兩種淋巴細(xì)胞來(lái)源的腫瘤細(xì)死亡率較高，尤其是 B 細(xì)胞來(lái)源的 U266，達(dá)到 80%的殺傷率。急性髓細(xì)胞白血細(xì)胞似乎對(duì)TfR-BiTE介導(dǎo)的PBMCs殺傷腫瘤細(xì)胞效果有 定的抵抗，TfR-BiTE導(dǎo)的 PBMCs 對(duì) K562 和 HL-60 兩種急性髓細(xì)胞白血病細(xì)胞系的殺傷效果甚至還遜于對(duì) KG-1a 的殺傷效果。同時(shí)，我們還發(fā)現(xiàn)，MIX 組的死亡率總是要高出 MED，說(shuō)明 CD3mAb 對(duì) T 細(xì)胞有 定的活化作用，而這部分活化的 T 細(xì)胞也有 定殺傷效果，但這種程度的活化和對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷效果與 TfR-BiTE 相比顯得不足道。TfR-BiTE 分別介導(dǎo) PBMCs 和活化的 T 細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞系

分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)：活化的 T 細(xì)胞對(duì) MOLT-4 的殺傷效果提升顯著，在效應(yīng)細(xì)胞數(shù)量減半的情況下，在抗體濃度僅為 10ng/ml 時(shí)，就達(dá)到最大殺傷效果，且最大殺傷效果比 PBMCs 的效果有所提升，說(shuō)明活化的 T 細(xì)胞的確比 na ve T 細(xì)胞具有更好的殺傷效果。從結(jié)果看，活化的 T 細(xì)胞對(duì) U266 的殺傷效果與 PBMCs 無(wú)異，可能是因?yàn)樾?yīng)細(xì)胞數(shù)量減半的原因，也可能是 U266 較敏感，PBMCs 中的 na veT 細(xì)胞就對(duì)其有明顯的殺傷效果。四、TfR-BiTE 體外殺傷原代腫瘤細(xì)胞1.白血病細(xì)胞 TfR 表達(dá)水平檢測(cè)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)白血病患者骨髓血中腫瘤細(xì)胞的 TfR 表達(dá)水平，結(jié)果見(jiàn)圖 5和圖 6。


本文編號(hào)：2914173